魚類主要過敏原小清蛋白金磁免疫層析試紙條的研制
發(fā)布時間：2022-01-11 14:44
魚類是人類重要的食物來源,不僅味道鮮美而且營養(yǎng)豐富。新鮮魚肉中富含15%20%的全價蛋白,1%10%的脂肪,并富含重要的不飽和脂肪酸。我國是水產養(yǎng)殖大國,占世界養(yǎng)殖水產品產量的70%以上,淡水漁業(yè)總面積達1760萬公頃占國土面積的1.8%。魚類及其制品含有豐富的營養(yǎng),同時也是FAO及WHO認定的導致人類過敏的八大類食物之一。其中魚肉中的小清蛋白（parvalbumin,PV）被視為主要的過敏原,因此開展針對魚類及其制品中小清蛋白強特異性、高靈敏度的檢測具有重要的理論和現實意義。本文研究主要包括小清蛋白單克隆抗體的制備及鑒定、金磁復合納米微粒的制備以及小清蛋白金磁免疫層析檢測方法的建立。具體研究內容如下:1.小清蛋白單克隆抗體的制備以高純度的PV免疫7只BALB/c小鼠,利用間接ELISA方法測小鼠抗血清效價,獲取效價最高的小鼠。取免疫小鼠的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行細胞融合,獲得雜交瘤細胞。間接ELISA方法篩選陽性孔,有限稀釋法進行3次亞克隆得到分泌同質的雜交瘤細胞株。采用小鼠體內誘生腹水法大量制備單抗。采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化單抗...
【文章來源】：上海師范大學上海市
【文章頁數】：81 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小青蛋白金磁性免疫層析試紙的研究內容
圖 2-1 小鼠抗血清效價分析圖 2-1 中的結果顯示，在第六次免疫后，3 號和 5 號小鼠的抗血清效價為28000，免疫效果良好。根據細胞融合實驗的要求，使用 3 號小鼠的脾細胞為細胞融合材料，使用 5 號小鼠的脾細胞作為備選。.4.2 雜交瘤細胞融合和陽性孔制備在 5 塊板中有細胞團生長的孔數為 425，融合率為 88.5%。經過兩次換液養(yǎng)，融合第 9 天取細胞上清檢測陽性孔，100μL/孔，用間接 ELISA 法檢測到，小清蛋白融合細胞板中有 21 個陽性孔，在細胞板中 21 個陽性孔中挑長勢良好的 5 個強陽性孔（OD450> 1.3）進行亞克。經過三次亞克隆和篩后，篩選出三個具有強陽性結果和良好生長的雜交瘤細胞，命名為 2A1，C3 和 3C3。亞克隆的目的是純化細胞，在亞克隆過程中，應盡可能選擇單細胞克隆組的孔。最后選擇的細胞系可以是滿足要求的純細胞。此外，當細胞板中檢測到強陽性孔時，應盡快進行亞克隆以篩選細胞。以避免陽性
圖 2-2 小清蛋白單克隆抗體效價分析2.4.4 腹水的純化及鑒定為了獲得小清蛋白單克隆抗體，必須濃縮和純化小鼠的腹水。鑒定純化腹水純度的方法是 SDS-PAGE，單克隆抗體濃度鑒定結果如圖所示。輕鏈蛋白的分子量約為 26KD。重鏈及輕鏈清晰可見，且圖中并未見多余雜條帶的出現，這就說明了該單克隆抗體純度很高，為后續(xù)的免疫層析檢測打好了基礎。M 1 2 3Heave chain
【參考文獻】：
期刊論文
[1]大豆蛋白源替代魚粉蛋白對魚類生長、消化及腸道組織的影響[J]. 段晶,王婧瑤,吳莉芳,瞿子惠,周鍇,楊蘭,王桂芹. 大豆科學. 2018(03)
[2]食物過敏的致敏途徑及發(fā)生機制的研究進展[J]. 王東明,左媛媛,何翔,張慧敏. 中國中西醫(yī)結合皮膚性病學雜志. 2017(05)
[3]食物過敏研究新動態(tài)[J]. 陳紅兵. 食品安全質量檢測學報. 2017(04)
[4]海鱸魚魚肉發(fā)酵過程中小清蛋白IgE結合能力的變化[J]. 高卿,李振興,米娜莎,林洪,呂良濤,張延杰. 食品科學. 2017(22)
[5]日本食物過敏原的管理及對我國的啟示[J]. 鄭穎,陳曙光,葉鈺,方卿穎,陳紅兵,高金燕. 食品科學. 2016(03)
[6]中國食品過敏原標識認知狀況分析[J]. 閆瑞,李坤,程景民,郝志媛. 中國公共衛(wèi)生. 2016(02)
[7]常見食物過敏原結構穩(wěn)定因素與致敏性的關系研究進展[J]. 張晴晴,吳子健,胡志和,王帥,王連芬. 食品科學. 2015(03)
[8]泛素連接酶和小清蛋白在腦性癱瘓小鼠模型海馬組織中的表達及其意義[J]. 秦明,胡瑩瑩,魏云艷,朱虹,王德廣. 神經解剖學雜志. 2015(01)
[9]運動疲勞對大鼠黑質網狀部小清蛋白表達的影響[J]. 孫麗娜. 體育科技文獻通報. 2014(06)
[10]免疫學技術在食品過敏原檢測中的應用[J]. 胡驍飛,王耀,鄧瑞廣,張改平. 食品科學. 2014(08)
博士論文
[1]水產品中危害物膠體金免疫層析毛細管檢測技術的研究[D]. 杜淑媛.中國海洋大學 2015
碩士論文
[1]消費者食品過敏原標簽的認知現狀與對策研究[D]. 閆瑞.山西醫(yī)科大學 2016
[2]基于金磁微粒的核酸純化新方法[D]. 劉蓓.西北大學 2008
[3]小清蛋白在孤獨癥模型大鼠情緒與認知相關腦區(qū)的表達及其發(fā)育研究[D]. 王維霞.復旦大學 2008
[4]多種食品過敏原體外快速檢測技術的研究[D]. 張在軍.暨南大學 2005
本文編號：3582963
【文章來源】：上海師范大學上海市
【文章頁數】：81 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小青蛋白金磁性免疫層析試紙的研究內容
圖 2-1 小鼠抗血清效價分析圖 2-1 中的結果顯示，在第六次免疫后，3 號和 5 號小鼠的抗血清效價為28000，免疫效果良好。根據細胞融合實驗的要求，使用 3 號小鼠的脾細胞為細胞融合材料，使用 5 號小鼠的脾細胞作為備選。.4.2 雜交瘤細胞融合和陽性孔制備在 5 塊板中有細胞團生長的孔數為 425，融合率為 88.5%。經過兩次換液養(yǎng)，融合第 9 天取細胞上清檢測陽性孔，100μL/孔，用間接 ELISA 法檢測到，小清蛋白融合細胞板中有 21 個陽性孔，在細胞板中 21 個陽性孔中挑長勢良好的 5 個強陽性孔（OD450> 1.3）進行亞克。經過三次亞克隆和篩后，篩選出三個具有強陽性結果和良好生長的雜交瘤細胞，命名為 2A1，C3 和 3C3。亞克隆的目的是純化細胞，在亞克隆過程中，應盡可能選擇單細胞克隆組的孔。最后選擇的細胞系可以是滿足要求的純細胞。此外，當細胞板中檢測到強陽性孔時，應盡快進行亞克隆以篩選細胞。以避免陽性
圖 2-2 小清蛋白單克隆抗體效價分析2.4.4 腹水的純化及鑒定為了獲得小清蛋白單克隆抗體，必須濃縮和純化小鼠的腹水。鑒定純化腹水純度的方法是 SDS-PAGE，單克隆抗體濃度鑒定結果如圖所示。輕鏈蛋白的分子量約為 26KD。重鏈及輕鏈清晰可見，且圖中并未見多余雜條帶的出現，這就說明了該單克隆抗體純度很高，為后續(xù)的免疫層析檢測打好了基礎。M 1 2 3Heave chain
【參考文獻】：
期刊論文
[1]大豆蛋白源替代魚粉蛋白對魚類生長、消化及腸道組織的影響[J]. 段晶,王婧瑤,吳莉芳,瞿子惠,周鍇,楊蘭,王桂芹. 大豆科學. 2018(03)
[2]食物過敏的致敏途徑及發(fā)生機制的研究進展[J]. 王東明,左媛媛,何翔,張慧敏. 中國中西醫(yī)結合皮膚性病學雜志. 2017(05)
[3]食物過敏研究新動態(tài)[J]. 陳紅兵. 食品安全質量檢測學報. 2017(04)
[4]海鱸魚魚肉發(fā)酵過程中小清蛋白IgE結合能力的變化[J]. 高卿,李振興,米娜莎,林洪,呂良濤,張延杰. 食品科學. 2017(22)
[5]日本食物過敏原的管理及對我國的啟示[J]. 鄭穎,陳曙光,葉鈺,方卿穎,陳紅兵,高金燕. 食品科學. 2016(03)
[6]中國食品過敏原標識認知狀況分析[J]. 閆瑞,李坤,程景民,郝志媛. 中國公共衛(wèi)生. 2016(02)
[7]常見食物過敏原結構穩(wěn)定因素與致敏性的關系研究進展[J]. 張晴晴,吳子健,胡志和,王帥,王連芬. 食品科學. 2015(03)
[8]泛素連接酶和小清蛋白在腦性癱瘓小鼠模型海馬組織中的表達及其意義[J]. 秦明,胡瑩瑩,魏云艷,朱虹,王德廣. 神經解剖學雜志. 2015(01)
[9]運動疲勞對大鼠黑質網狀部小清蛋白表達的影響[J]. 孫麗娜. 體育科技文獻通報. 2014(06)
[10]免疫學技術在食品過敏原檢測中的應用[J]. 胡驍飛,王耀,鄧瑞廣,張改平. 食品科學. 2014(08)
博士論文
[1]水產品中危害物膠體金免疫層析毛細管檢測技術的研究[D]. 杜淑媛.中國海洋大學 2015
碩士論文
[1]消費者食品過敏原標簽的認知現狀與對策研究[D]. 閆瑞.山西醫(yī)科大學 2016
[2]基于金磁微粒的核酸純化新方法[D]. 劉蓓.西北大學 2008
[3]小清蛋白在孤獨癥模型大鼠情緒與認知相關腦區(qū)的表達及其發(fā)育研究[D]. 王維霞.復旦大學 2008
[4]多種食品過敏原體外快速檢測技術的研究[D]. 張在軍.暨南大學 2005
本文編號：3582963
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