食物過敏是全世界關(guān)注的食品安全問題之一,并且患病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢。蟹類具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值,廣受消費(fèi)者喜愛,但其引起的食物過敏問題也不容忽視。擬穴青蟹（Scylla paramamosain）作為我國東南沿海地區(qū)的重要水產(chǎn)資源,其食物過敏病例也日益增多。本研究以擬穴青蟹為實(shí)驗(yàn)對象,對青蟹肌肉過敏原磷酸丙糖異構(gòu)酶（Triosephosphate isomerase,TIM）的晶體結(jié)構(gòu)、交叉反應(yīng)性及抗原表位進(jìn)行分析,同時(shí)利用定點(diǎn)突變技術(shù)改變TIM致敏性,以期獲得低免疫結(jié)合活性的TIM突變蛋白,為甲殼類水產(chǎn)品分子診斷及免疫治療奠定基礎(chǔ)。本研究首先對擬穴青蟹重組TIM進(jìn)行體外表達(dá),利用懸滴法獲得蛋白質(zhì)晶體,并對沉淀劑濃度、緩沖溶液pH值等結(jié)晶條件進(jìn)行優(yōu)化,確定結(jié)晶條件為蛋白濃度20 mg/mL、0.1M citric acid（pH 4.6）、22%PEG 6000;進(jìn)一步通過X射線衍射獲得分辨率為1.8?的TIM晶體,其結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)二聚體且單體為（β/α）₈筒狀;晶體結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明,擬穴青蟹TIM具有高度保守的一級(jí)、二級(jí)結(jié)構(gòu),且筒狀內(nèi)部β折疊在不同物種間較為保... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 食物過敏概況
    1.2 食物過敏原及其抗原表位
    1.3 過敏原的結(jié)構(gòu)生物學(xué)及交叉反應(yīng)
    1.4 甲殼類水產(chǎn)食物過敏原研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株及載體
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 甲殼類水產(chǎn)品過敏患者血清
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要試劑
        2.1.6 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 野生型TIM的表達(dá)與鑒定
        2.2.2 野生型TIM多克隆抗體的制備
        2.2.3 野生型TIM的晶體初篩及條件優(yōu)化
        2.2.4 野生型TIM的 X射線衍射數(shù)據(jù)收集及結(jié)構(gòu)解析
        2.2.5 不同物種間TIM結(jié)構(gòu)的比較分析
        2.2.6 TIM構(gòu)象表位的關(guān)鍵氨基酸定點(diǎn)突變及重組表達(dá)
        2.2.7 突變型TIM的理化性質(zhì)分析
        2.2.8 突變型TIM的免疫結(jié)合活性分析
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 野生型TIM的表達(dá)、鑒定及多克隆抗體制備
        3.1.1 野生型TIM的表達(dá)與鑒定
        3.1.2 野生型TIM的多克隆抗體制備
    3.2 野生型TIM的晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析
        3.2.1 野生型TIM的結(jié)晶初篩及條件優(yōu)化
        3.2.2 野生型TIM晶體的衍射數(shù)據(jù)處理
        3.2.3 野生型TIM晶體的結(jié)構(gòu)解析
        3.2.4 不同物種間TIM結(jié)構(gòu)的比較分析
    3.3 TIM構(gòu)象表位關(guān)鍵氨基酸的基因定點(diǎn)突變及重組表達(dá)
        3.3.1 TIM突變體的構(gòu)建
        3.3.2 突變型TIM的表達(dá)與鑒定
    3.4 突變型TIM的理化性質(zhì)分析
        3.4.1 突變型TIM的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.4.2 突變型TIM的 pH穩(wěn)定性及熱穩(wěn)定性分析
        3.4.3 突變型TIM的表面靜電勢分析
    3.5 突變型TIM的免疫結(jié)合活性分析
        3.5.1 突變型TIM的 Dot blot及 i ELISA分析
        3.5.2 突變型TIM的嗜堿性粒細(xì)胞激活分析
第4章 討論
    4.1 TIM的結(jié)構(gòu)特征分析
    4.2 TIM的免疫交叉反應(yīng)分析
    4.3 突變型TIM與野生型TIM的比較分析
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間科研成果



本文編號(hào)：3493791