軟腐病和酸腐病分別是獼猴桃和櫻桃番茄常見的采后真菌病害,本研究從自然發(fā)病的紅陽獼猴桃和櫻桃番茄上分離出病原菌并進(jìn)行回接驗(yàn)證,通過形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)手段,最終確定從紅陽獼猴桃和櫻桃番茄分離出的病原菌分別是擬莖點(diǎn)霉Diaporthe phaseolorum和白地霉Geotrichum candidum。課題組已有病原菌株灰霉Botrytis cinerea同樣是常見的櫻桃番茄酸腐病病原真菌。因此找到合適的抑菌劑加強(qiáng)對這三種病原菌的抑制,對于減少獼猴桃和番茄的采后病害、促進(jìn)相關(guān)產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展十分重要。綠原酸是一種從天然植物中提取出的廣譜抗真菌抑菌劑,在果蔬保鮮、食品防腐、醫(yī)藥治療等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用,具有重要的研究價(jià)值和應(yīng)用前景。在體外試驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)綠原酸能夠抑制病原菌在培養(yǎng)基上的生長情況、降低其孢子萌發(fā)率和萌發(fā)后芽管長度,且上述抑制作用與劑量明顯相關(guān)。此外綠原酸還可以促進(jìn)病原菌產(chǎn)孢,說明病原菌遭遇逆境脅迫。此外還初步探究了抑制作用機(jī)理,研究發(fā)現(xiàn)綠原酸能顯著抑制病原菌菌絲的活力,促進(jìn)線粒體超氧化物的積累、提高細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺濃度,降低線粒體膜電位、降低其ATP含量,并能促... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

研究技術(shù)路線圖

第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果33第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1病原菌的鑒定與生物學(xué)特性研究4.1.1病原菌的分離純化經(jīng)過PDA培養(yǎng)基純培養(yǎng)，從自然發(fā)病的紅陽獼猴桃和櫻桃番茄中分別得到真菌菌株1種。如圖4.1所示，將分離所得的病原菌菌株分別接種至健康的獼猴桃和千禧番茄上，3-5天時(shí)均可見接種部位有明顯的病斑，且逐漸向外擴(kuò)展，發(fā)病特征與自然發(fā)病的果實(shí)相一致。圖4.1自然發(fā)病水果及回接發(fā)病情況Fig.4.1Naturaldiseasefruitsandpathogensinoculation再次從發(fā)病的水果上分離病原菌，經(jīng)過PDA培養(yǎng)基再次純培養(yǎng)，分離得到的病原菌菌落形態(tài)與第一次分離得到的病原菌菌落形態(tài)相一致。根據(jù)科赫法則，可認(rèn)定分離得到的兩種病原菌分別是獼猴桃軟腐病和櫻桃番茄酸腐病的病原菌。4.1.2病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定如圖4.2A，從獼猴桃上分離所得真菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后菌落呈圓形，菌絲為白色棉狀，菌落較為平坦，菌絲生長較為致密；培養(yǎng)1個(gè)月附近，可見菌落上有黑色分生孢子器，其上可見乳白色或乳黃色油滴狀液體，挑取少量液體并稀釋于300μL無菌水后在光學(xué)顯微鏡下觀察，可見該菌產(chǎn)生兩種分生孢子，甲型（α）孢子呈紡錘形、無色透明、孢子兩側(cè)含兩個(gè)油球；乙型（β）孢子呈彎鉤或直線形、無色且孢子兩側(cè)不含油球。其生物學(xué)形態(tài)符合擬莖點(diǎn)霉有性態(tài)的基本特征[82]。如圖4.2B，從櫻桃番茄上分離所得真菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后菌落呈圓形，菌絲為白色絨毛狀或粉狀，菌落較為平坦，菌落厚度適中偏厚，部分培養(yǎng)基上中心略微突起；顯微鏡觀察，該菌菌絲無色透明，易分叉分支，部分菌絲有隔膜，可觀察到該菌易于通過裂殖的方式產(chǎn)生大量節(jié)孢子，其孢子無色透明，外形為橢圓形或長筒形，部分孢子末端稍平或圓鈍，孢子大小約為(2~5)μm×(5~15)μm。

合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)歷碩士研究生學(xué)位論文34其生物學(xué)形態(tài)符合地霉屬真菌的基本形態(tài)特征[82]。圖4.2病原菌形態(tài)學(xué)特征Fig.4.2Morphologicalcharacteristicsofpathogens(Bar=10μm)4.1.3病原菌的分子生物學(xué)鑒定圖4.3病原菌分子生物學(xué)進(jìn)化樹Fig.4.3Biologicalevolutionarytreeofpathogenicfungi將測序結(jié)果在美國國家生物信息中心(NCBI)上進(jìn)行比對，由圖4.3a可知，從紅陽獼猴桃上分離所得菌株為擬莖點(diǎn)霉（Diaporthe），通過分析進(jìn)化樹，可以得知該菌株與擬莖點(diǎn)霉Diaporthephaseolorum有99%的親緣相似率，且同該屬內(nèi)其他種親緣較遠(yuǎn)。結(jié)合形態(tài)學(xué)分析結(jié)果可以鑒定該菌株為半知菌亞門、腔孢綱、球殼孢目、間座殼科、間座殼屬真菌擬莖點(diǎn)霉Diaporthephaseolorum。將測序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行比對，由圖4.3b可知，從櫻桃番茄上分離所得真菌為白地霉（Geotrichum），通過分析進(jìn)化樹，可以得知該菌株與白地霉Geotrichumcandidum有99%的親緣相似率，且同該屬內(nèi)其他種親緣較遠(yuǎn)。結(jié)合形態(tài)學(xué)分析結(jié)果可以鑒定該菌株為半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目、叢梗孢科、地霉屬真菌白地霉Geotrichumcandidum。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]姜黃素的抗氧化性及對獼猴桃病原菌抑菌效果研究[D]. 王曉芙.合肥工業(yè)大學(xué) 2018
[3]殼聚糖抑制櫻桃番茄采后灰霉病和青霉病及分子機(jī)理研究[D]. 汪宏濤.合肥工業(yè)大學(xué) 2017
[4]姜黃素保鮮劑對采后馬水桔保鮮效果的研究及應(yīng)用[D]. 司徒滿泉.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院 2014



本文編號：3473222