隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生巨變的同時(shí),食品行業(yè)也面臨著越來越大的挑戰(zhàn)。動(dòng)物源性成分摻假事件等食品惡性違規(guī)事件對消費(fèi)者健康以及市場經(jīng)濟(jì)造成了非常大的影響。為了能更好的對食品中動(dòng)物源性成分摻假進(jìn)行檢測,保護(hù)消費(fèi)者的健康和市場的穩(wěn)定。本研究通過三種不同的方法對DNA進(jìn)行提取,篩選出經(jīng)濟(jì)、快速、高質(zhì)量的DNA提取方法,以滿足后續(xù)PCR擴(kuò)增。并通過熒光定量PCR和AFLP-PCR技術(shù)分別對食品中豬源性成分進(jìn)行定量和定性檢測,最后建立AFLP-PCR法對豬的不同品種進(jìn)行鑒定,為食品中主豬源性成分檢測提供技術(shù)依據(jù),主要內(nèi)容包括:（1）采用SDS法、異硫氰酸胍法和試劑盒法這三種方法提取動(dòng)物肌肉組織DNA,對提取DNA的濃度和純度進(jìn)行了比較。并設(shè)計(jì)豬、牛、羊、雞、草魚的普通PCR引物進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增,來驗(yàn)證三種方法所提取DNA的質(zhì)量。結(jié)果顯示,異硫氰酸胍法無需水浴加熱,單個(gè)樣品可以在30min內(nèi)完成,所提取的DNAOD₂₆₀/OD₂₈₀比值為1.8左右,OD₂₆₀/OD₂₃₀的比值均大于2.0,異硫氰酸胍... 

【文章來源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A不同物種生鮮組織DNA電泳檢測

第2章不同動(dòng)物肌肉組織中DNA提取方法的研究27圖2.1B不同高壓組織DNA電泳檢測Fig2.1BHigh-pressuretissueDNAelectrophoresisdetectionofdifferenttissues（M：marker(DL10000bp)；1、2、3、4、5為SDS法提取的高壓組織基因組DNA；6、7、8、9、10為試劑盒法提取的高壓組織基因組DNA；11、12、13、14、15為異硫氰酸胍法提取的高壓組織基因組DNA。）2.3.2DNA的純度及濃度測定用酶標(biāo)儀測定所提取DNA的純度和濃度，結(jié)果如表2.2、表2.3所示。OD260/OD280的比值用來體現(xiàn)蛋白質(zhì)和酚等雜質(zhì)的去除情況，OD260/OD280的比值在1.8左右，說明DNA純度高，低說明DNA中有蛋白質(zhì)以及苯酚等雜質(zhì)未除盡，比值高則說明有RNA。230nm處是多肽、苯酚、碳水化合物的吸光度，所以O(shè)D260/OD230比值反映了DNA樣品碳水化合物和鹽類等物質(zhì)的污染情況。OD260/OD230比值一般大于2，比值低說明有鹽分、氨基酸和核苷酸等小分子物質(zhì)存在[72]。表2.2不同物種生肉鮮DNA濃度及純度檢測（±s）Table2.2DetectionoffreshDNAconcentrationandpurityofrawmeatofdifferentspecies（±s）名稱Name豬Pig牛Cattle羊Sheeo雞Chicken草魚GrasscarpSDS法SDSmethod濃度/ng/μL129.2±4.8115.7±6.6163.9±4.5157.6±4.8133.6±9.3OD260/2801.9±0.171.67±0.131.79±0.11.82±0.111.71±0.1OD260/2301.94±0.111.98±0.261.83±0.091.79±0.122.03±0.08試劑盒法DNAkitmethod濃度/ng/μL249.3±2.5251.9±1.69229.2±3.22262.6±5.8246.8±5.4OD260/2801.81±0.131.83±0.11.79±0.131.82±0.051.84±0.12

第2章不同動(dòng)物肌肉組織中DNA提取方法的研究292.2A的試劑盒法和異硫氰酸胍法提取的生鮮組織DNA經(jīng)過PCR擴(kuò)增后，電泳檢測的條帶亮度明亮清晰，SDS法提取的基因組DNA經(jīng)過PCR后條帶明亮度程度不一，10、13、14號樣品清晰度和明亮度較差。表明此三個(gè)樣品PCR產(chǎn)物濃度低且產(chǎn)物質(zhì)量差。圖2.2B的三種方法提取的基因組DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后于瓊脂糖凝膠電泳檢測觀察，發(fā)現(xiàn)4、9、14、15號條帶顏色較暗且條帶彌散嚴(yán)重，表明樣品基因組DNA的PCR產(chǎn)物濃度低，且完整性低于其他樣品。圖2.2A不同組織生鮮肉PCR電泳檢測Fig.2.2APCRdetectionoffreshmeatfromdifferenttissues（M：marker(100bp)；1、2、3、4、5為試劑盒提取的生鮮基因組作為模板；6、7、8、9、10為異硫氰酸胍法提取的生鮮基因組作為模板；11、12、13、14、15為SDS法提取的生鮮基因組作為模板，cytb基因擴(kuò)增后的效果。）圖2.2B不同組織高壓肉PCR電泳檢測Fig.2.2BPCRdetectionofdifferenttissuesofhigh-pressuremeat

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3414782