磺胺類藥物是一種抗菌效果好且價(jià)格低廉的廣譜類抗生素,在畜牧生產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用十分廣泛。由于磺胺藥物的濫用以及在人體、動(dòng)物和環(huán)境中的殘留,對人體健康造成了嚴(yán)重的威脅。為了防止藥物殘留對人類帶來危害,迫切需要一種快速、靈敏的磺胺藥物分析檢測方法。仿生酶聯(lián)免疫分析方法是近幾年國內(nèi)外研究的熱點(diǎn),該方法是以仿生抗體為基礎(chǔ),并結(jié)合了酶的催化放大作用,但由于天然酶的分子量大且穩(wěn)定性差,制約了其在仿生免疫分析中的應(yīng)用。近年來,納米材料模擬酶由于具有天然酶的催化活性,且性質(zhì)穩(wěn)定,在免疫分析檢測中代替天然酶作為標(biāo)記物,具有較好的應(yīng)用前景。本研究以分子印跡聚合物作為識(shí)別的仿生抗體,用納米酶代替辣根過氧化物酶（HRP）作為標(biāo)記物,建立了兩種檢測磺胺嘧啶殘留的新型方法。主要研究結(jié)果如下:（1）基于Au@SiO₂納米酶標(biāo)記仿生免疫分析檢測磺胺嘧啶方法。以磺胺嘧啶為模板分子,甲基丙烯酸為功能單體,采用本體聚合法在96孔酶標(biāo)板上制備了分子印跡膜作為仿生抗體,以制備的Au@SiO₂納米模擬酶作為標(biāo)記物,建立了一種快速檢測磺胺嘧啶的納米酶標(biāo)記仿生免疫分析方法。在最佳條件下,該方法的... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

磺胺類藥物分子結(jié)構(gòu)

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文19乙腈和4mL二甲基亞砜的混合液中，室溫下磁力攪拌30min，加入20mmol（3.770mL）二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）和20mg偶氮二異丁腈（AIBN），超聲15min，氮吹15min，然后在氮?dú)猸h(huán)境下60℃反應(yīng)18h。聚合反應(yīng)結(jié)束后將獲得的固體研磨過篩，用300mL甲醇/冰乙酸混合液（9:1，v/v）進(jìn)行索氏提取，直到檢測萃取溶劑中無模板分子檢出，再用300mL甲醇索氏洗脫至中性。最后，60℃真空干燥12h得到磺胺嘧啶MIP。作為對照，除不加模板分子外，非印跡聚合物（Non-ImprintedPolymer,NIP）按照上述相同的流程制備。2.5.4納米酶標(biāo)記物的制備將0.011g磺胺嘧啶抗原（0.045mM）溶于10mL甲醇中，室溫下超聲5min，然后加入10μL戊二醛（25%）水溶液，室溫下避光攪拌60min，再加入5mL氨基化的納米酶溶液，混勻后室溫下避光反應(yīng)60min。反應(yīng)結(jié)束后，離心洗滌，將得到的標(biāo)記物4℃下保存。2.5.5直接競爭仿生免疫分析流程2.5.5.1基于Au@SiO2納米酶標(biāo)記仿生免疫分析檢測磺胺嘧啶方法圖2仿生酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的示意圖。Fig.2.Schematicrepresentationofthebiomimeticenzyme-linkedimmunosorbentassay.用PBS/T溶液洗板3次，在酶標(biāo)板上每孔加入100μL磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品提取液，將不加入磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品提取液的孔作為對照孔（對照孔加入100μL的稀釋溶劑），之后立即在每個(gè)孔加入100μL酶標(biāo)溶液，在室溫下震蕩孵育60min。反

基于納米酶標(biāo)記仿生免疫分析檢測磺胺嘧啶的方法研究223結(jié)果與分析3.1基于Au@SiO2納米酶標(biāo)記仿生免疫分析檢測磺胺嘧啶方法3.1.1納米金棒的紫外全波長掃描對合成的納米金棒（AuNRs）進(jìn)行紫外全波長掃描分析。結(jié)果如圖3所示，在810nm處出現(xiàn)了最大吸收峰，這是AuNRs的特征峰，表明AuNRs已成功合成。圖3AuNRs紫外全波長掃描Fig.3UltravioletabsorptionspectrumofAunanorods3.1.2磺胺嘧啶分子印跡膜的電鏡掃描圖4印跡膜掃描電鏡圖Fig.4SEMimagesoftheimprintedfilm為了更直觀的了解所制備印跡膜的結(jié)構(gòu)，對其進(jìn)行了掃描電鏡分析。如圖4所示，印跡膜表面形成孔穴結(jié)構(gòu)，具有識(shí)別位點(diǎn)，表明對目標(biāo)分子具有特異性識(shí)別作用。此外，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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