南極磷蝦（Euphausia superba）作為21世紀新興產(chǎn)業(yè)發(fā)展的載體,肌肉中高氟異常是限制其食用開發(fā)利用的關鍵。由于生物體對氟的吸收和生物利用度存在差異,而現(xiàn)有的研究主要集中在對氟的總量分析上,對氟的形態(tài)分析方面,還處于初步探索階段,對南極磷蝦肌肉與氟的結合狀態(tài)也處于假設推斷階段,人們對南極磷蝦肌肉中氟形成機制尚不清楚。本研究基于南極磷蝦肌肉中氟存在多種形態(tài)的結合,以南極磷蝦肌肉為實驗原材料,采用響應面法優(yōu)化胰蛋白酶酶解工藝,從肌肉中分離提取多肽,然后采用SDS-PAGE凝膠電泳、超濾、Sephadex G-25葡聚糖凝膠層析、高效液相色譜等一系列技術對多肽進行分離純化,并將純化出來的多肽進行氟含量的分析以及分子量的測定,并采用LC-MS/MS將純化出來的含氟多肽進行氨基酸分析以及蛋白鑒定,建立了一種分離南極磷蝦含氟多肽的新方法,并通過蛋白鑒定結合理化性質分析對其結合形式、結構進行初探,旨在為今后南極磷蝦資源開發(fā)利用提供理論基礎,具體研究內(nèi)容:1.南極磷蝦蛋白的酶解工藝研究以氨基氮含量為指標,采用甲醛電位滴定法測定胰蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、風味... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

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【學位級別】：碩士

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本課題技術路線圖

圖 2-1 不同生物酶對南極磷蝦蛋白的酶解效果Fig.2-1 Enzymatic hydrolysis effect of different biological enzymes on Antarctic krill protein以酶解液中氨基氮含量為指標，6 種生物酶的酶解效果如圖 2-1 所示，胰蛋白酶水解得到的酶解液中氨基氮含量最高，可達到 49.36 ±1.11 mg/g，堿性蛋白酶酶解效果次之，胃蛋白酶酶解液氨基氮含量最低，僅有 20.42 ±0.50 mg/g，實驗結果與倪玲等[60]結果一致，因此本實驗選取胰蛋白酶為酶解南極磷蝦蛋白的理想生物酶。2.4.3 單因素實驗對酶解效果的影響2.4.3.1 酶解溫度對酶解效果的影響如圖 2-2 所示，在 35.0℃~45.0℃范圍內(nèi)，氨基氮含量從 46.61 ±0.73 mg/g 逐漸升高到最高值 49.91 ±0.26 mg/g，當溫度超過 45.0℃時，隨著溫度的升高，氨基氮含量持續(xù)下降，當?shù)竭_ 55.0℃時，氨基氮含量下降到 42.93 ±0.05 mg/g。這

圖 2-2 酶解溫度對南極磷蝦蛋白酶解效果的影響ig.2-2 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on proteolytic effect of Antarctic kr.2 pH 對酶解效果的影響如圖2-3所示，在pH7.0~8.0范圍內(nèi)，酶解液中氨基氮含量從45.41 ±0.32升高到 49.40 ±0.82 mg/g，水解度達到最大值，之后繼續(xù)增大至 pH 為液中氨基氮含量迅速下降至 42.76 ±0.07 mg/g。這是因為酶作為一種特，其酶促反應速率與 pH 有密切關系，當 pH 達到某一值時，酶的活性最反應速率最大，當 pH 高于或低于這一值時，酶的天然構象和酶與底物態(tài)就會受到影響，進而影響酶的穩(wěn)定性、抑制酶的活性甚至失活[70]，最佳 pH 為 8.0。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3292455