根據(jù)《中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》顯示:2018年淡水養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)到2959.84萬(wàn)噸,比2008年增長(zhǎng)42.81%。隨著淡水養(yǎng)殖面積和產(chǎn)量不斷增大,淡水產(chǎn)品加工業(yè)也隨之迅速發(fā)展,如魚(yú)糜加工產(chǎn)業(yè),但與此同時(shí),淡水魚(yú)加工業(yè)所產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物并沒(méi)有得到有效利用,資源被浪費(fèi),還使加工產(chǎn)品價(jià)格較昂貴。魚(yú)骨是魚(yú)糜加工業(yè)的主要副產(chǎn)物之一,含有豐富的蛋白、不飽和脂肪酸、鈣、磷等營(yíng)養(yǎng)成分,且鈣磷比例接近2:1,易被人體吸收,是一種優(yōu)良的營(yíng)養(yǎng)食物資源。為實(shí)現(xiàn)資源高值化利用,本著變廢為寶、促進(jìn)淡水漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展的理念,本文以鰱魚(yú)骨為原料,采用酶解技術(shù)優(yōu)化制備膠原多肽,經(jīng)Sephadex G-25分子層析分離純化,得到不同分子量多肽組分并分析其氨基酸組成,研究膠原多肽及其各組分的抗氧化活性、鈣離子結(jié)合活性,為其應(yīng)用奠定一定的基礎(chǔ)。通過(guò)LC-MS/MS對(duì)最強(qiáng)抗氧化活性、高鈣結(jié)合活性的組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,探究其結(jié)構(gòu)與抗氧化性、鈣離子螯合之間的關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:（1）從中性蛋白酶、堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、胰蛋白酶和復(fù)合蛋白酶中篩選對(duì)酶解鰱魚(yú)骨粉制備膠原多肽的最優(yōu)酶,并以膠原多肽得率結(jié)合水解度為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察料液比、酶添加... 

【文章來(lái)源】：江西師范大學(xué)江西省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

正常人群和骨質(zhì)疏松患者的骨質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)比圖①

鰱魚(yú)骨膠原多肽的制備及其抗氧化、鈣螯合活性的研究9鈣螯合形成廉價(jià)的魚(yú)骨肽-鈣復(fù)合物，極大提高淡水魚(yú)副產(chǎn)物綜合利用率，且具有廣闊的發(fā)展前景。1.7肽-鈣復(fù)合物的研究現(xiàn)狀1.7.1螯合物的定義螯合物是指金屬離子與提供電子基團(tuán)的物質(zhì)以配位鍵的方式結(jié)合，形成具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的絡(luò)合物，提供電子的物質(zhì)稱為配體，又稱為螯合劑。由于螯合劑的成環(huán)作用使螯合物與其組成和結(jié)構(gòu)相近的非螯合物相比，具有更高的穩(wěn)定性，其結(jié)構(gòu)如圖1-2所示[76,77]。當(dāng)配體為多肽或氨基酸時(shí)，形成的螯合物為多肽螯合物或氨基酸螯合物。圖1-2螯合物分子結(jié)構(gòu)圖Fig.1-2Molecularstructureofchelatecompound1.7.2肽-鈣復(fù)合物結(jié)構(gòu)表征的分析方法肽-鈣復(fù)合物是指活性肽與鈣離子以配位鍵的方式進(jìn)行螯合而形成的新產(chǎn)物。其結(jié)構(gòu)的分析方法主要有UV、FTIR和SEM等，這些方法較好地證明了活性肽和肽-鈣復(fù)合物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上存在一定差異，分屬于不同的物質(zhì)，從而證明有新物質(zhì)的生成。（1）UV分析：依據(jù)物質(zhì)的分子或離子對(duì)紫外、可見(jiàn)光的吸收所產(chǎn)生紫外可見(jiàn)光譜的吸收程度，引起物質(zhì)中的電子能級(jí)發(fā)生躍遷，進(jìn)而對(duì)物質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)、含量進(jìn)行分析、測(cè)定和推斷。膠原多肽的肽鍵在200-230nm之間有較強(qiáng)的特征吸收峰，與鈣離子螯合之后，其內(nèi)部電子發(fā)生躍遷變化，導(dǎo)致膠原多肽的特征吸收峰發(fā)生整體紅移。Wang等[78]掃描分離純化之后的小肽和肽-鈣復(fù)合物在190-400nm的UV圖，觀察小肽和肽-鈣復(fù)合物的UV圖明顯不同，相比小肽而

處的OD值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2-1所示，其標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為Y=0.0099X+0.0051（R2=0.9999），表明在L-酪氨酸質(zhì)量濃度為0-200μg/mL的范圍內(nèi)，OD值（Y）與L-酪氨酸質(zhì)量濃度（X，μg/mL）具有良好的線性關(guān)系，可用于計(jì)算蛋白酶活力。根據(jù)L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算5種蛋白酶活力，其結(jié)果如表2-7所示，復(fù)合蛋白酶的活力最高，達(dá)到16.80×104U/g，然后依次是堿性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶。0501001502000.00.51.01.52.0Y=0.0099X+0.0051R2=0.9999OD值(660nm)L-酪氨酸濃度(μg/mL)圖2-1L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1L-tyrosinestandardcurve2.5.4最優(yōu)酶篩選結(jié)果在蛋白酶的作用下，魚(yú)骨中的膠原蛋白會(huì)進(jìn)行水解形成膠原多肽，過(guò)度水解則會(huì)進(jìn)一步將膠原多肽水解成分子量較小的短肽或游離氨基酸，導(dǎo)致膠原多肽含量的降低[111]。5種不同蛋白酶對(duì)鰱魚(yú)骨粉的酶解效果如圖2-2所示，其中，風(fēng)味蛋白酶的水解度最高，然后依次是復(fù)合蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶。但經(jīng)復(fù)合蛋白酶酶解之后，酶解液中膠原多肽得率最高，達(dá)到43.72%（P<0.05），風(fēng)味蛋白酶酶解得到的膠原多肽含量較低，是因?yàn)槠渌舛雀撸z原蛋白被水解更徹底，部分膠原多肽被過(guò)度水解形成游離氨基酸。而堿性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的水解度較低，水解鰱魚(yú)骨粉中膠原蛋白的能力弱于復(fù)合蛋白酶，故其膠原多肽含量低于復(fù)合蛋白酶。因此，在酶活力和酶解時(shí)間相同的情況下，復(fù)合蛋白酶酶解鰱魚(yú)骨粉制備膠原多肽的效率最高。本次實(shí)驗(yàn)使用的復(fù)合蛋白酶是由多種酶混合復(fù)配而成，主要以堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶為主，其主要作用位點(diǎn)是疏水氨基酸[112]，與其他蛋白酶相比，可以獲得更多的抗氧化肽，且可一定程度上降低苦味肽的形成[113]?

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3282808