發(fā)布時間：2021-05-07 10:35

　　本研究比較了不同產(chǎn)地C.lentillifera的營養(yǎng)成分;利用單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了長莖葡萄蕨藻多糖（Caulerpa lentillifera polysaccharide,CLP）的提取工藝;分離純化出具有免疫刺激活性的長莖葡萄蕨藻多糖P1（Caulerpa lentillifera polysaccharide-P1,CLP-P1）,采用甲基化、核磁共振（Nuclear magnetic resonance,NMR）等技術(shù)鑒定了其結(jié)構(gòu)信息;采用ELISA、流式細(xì)胞儀、q RT-PCR、Western blot和轉(zhuǎn)錄組學(xué)等方法研究CLP-P1免疫刺激活性的分子機(jī)制,主要結(jié)果如下:1. C.lentillifera的營養(yǎng)成分分析本研究對海南省和山東省采集的C.lentillifera的營養(yǎng)成分進(jìn)行了綜合分析,并與先前報道不同產(chǎn)地的C.lentillifera和兩種不同種類的海藻進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)海南省和山東省的C.lentillifera中的多糖含量高于E.cottonii和S.polycystum的含量。山東省的C.lentillifera必需氨基酸組成更符合FAO/WHO的理想模... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 巨噬細(xì)胞極化及信號通路
    1.2 天然產(chǎn)物的免疫調(diào)節(jié)活性
        1.2.1 免疫調(diào)節(jié)活性機(jī)制
        1.2.2 免疫調(diào)節(jié)活性物質(zhì)
    1.3 海藻多糖的生物活性
        1.3.1 海藻多糖的抗氧化活性
        1.3.2 海藻多糖的抗腫瘤活性
        1.3.3 海藻多糖的免疫調(diào)節(jié)活性
        1.3.4 海藻多糖的抗凝血活性
    1.4 C.lentillifera的研究進(jìn)展
    1.5 論文研究的背景及目的意義、內(nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)
        1.5.1 論文的背景及目的意義
        1.5.2 論文研究的主要內(nèi)容
        1.5.3 論文的創(chuàng)新點(diǎn)
        1.5.4 技術(shù)路線圖
2 材料與方法
    2.1 原材料與細(xì)胞
    2.2 試驗(yàn)試劑
    2.3 儀器與設(shè)備
    2.4 C.lentillifera的營養(yǎng)成分分析
        2.4.1 基本營養(yǎng)成分分析
        2.4.2 氨基酸組成分析
        2.4.3 脂肪酸組成分析
        2.4.4 礦物質(zhì)元素分析
    2.5 CLP提取工藝優(yōu)化
        2.5.1 CLP的提取
        2.5.2 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.5.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.6 CLP-P1分離純化及結(jié)構(gòu)解析
        2.6.1 CLP-P1的分離純化
        2.6.2 CLP-P1的分子量
        2.6.3 CLP-P1的單糖組成分析
        2.6.4 CLP-P1的FTIR分析
        2.6.5 CLP-P1的甲基化作用分析
        2.6.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
    2.7 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW2647 的免疫刺激活性
        2.7.1 巨噬細(xì)胞RAW264.7的培養(yǎng)
        2.7.2 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 增殖的影響
        2.7.3 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 吞噬作用的影響
        2.7.4 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7 分泌NO的影響
        2.7.5 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7 分泌ROS的影響
        2.7.6 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 分泌細(xì)胞因子的影響
        2.7.7 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 分泌的細(xì)胞因子基因水平上的影響
    2.8 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7的TLR4 受體的影響
        2.8.1 CLP-P1的胺化
        2.8.2 FITC的共價耦合
        2.8.3 不同濃度Try-CLP-P1-FITC與巨噬細(xì)胞RAW264.7 的作用
        2.8.4 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 與巨噬細(xì)胞RAW264.7 的結(jié)合位點(diǎn)作用
        2.8.5 Western blot測定CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7中TLR4 的影響
    2.9 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 免疫刺激活性的基因表達(dá)影響
    2.10 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 C.lentillifera營養(yǎng)成分分析
        3.1.1 不同地區(qū)基本營養(yǎng)成分分析
        3.1.2 氨基酸組成分析
        3.1.3 脂肪酸組成分析
        3.1.4 礦物質(zhì)元素分析
    3.2 CLP提取條件優(yōu)化
        3.2.1 單因素試驗(yàn)
        3.2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)
    3.3 CLP-P1分離純化及結(jié)構(gòu)解析
        3.3.1 CLP-P1的分離純化
        3.3.2 CLP-P1的分子量
        3.3.3 CLP-P1單糖組成分析
        3.3.4 CLP-P1的傅立葉紅外光譜分析
        3.3.5 CLP-P1的甲基化作用分析
        3.3.6 CLP-P1 的核磁共振(NMR)分析
    3.4 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7 的免疫刺激活性
        3.4.1 CLP各組分對巨噬細(xì)胞RAW246.7 的細(xì)胞活性的影響
        3.4.2 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 吞噬能力的影響
        3.4.3 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 分泌NO的影響
        3.4.4 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 分泌ROS的影響
        3.4.5 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 分泌細(xì)胞因子的影響
        3.4.6 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW246.7 相關(guān)細(xì)胞因子基因水平上的影響
    3.5 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7的TLR4 受體的影響
        3.5.1 Try-CLP-P1與FITC結(jié)合分析
        3.5.2 不同濃度Try-CLP-P1-FITC與 RAW264.7 的結(jié)合情況
        3.5.3 Try-CLP-P1-FITC和 Anti-TLR4 與巨噬細(xì)胞RAW264.7 的結(jié)合位點(diǎn)作用
        3.5.4 CLP-P1 誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞的TLR4 信號通路激活
    3.6 CLP-P1 對巨噬細(xì)胞RAW264.7 的免疫刺激活性機(jī)制的探討
        3.6.1 CLP-P1 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 的差異表達(dá)基因分析
        3.6.2 CLP-P1 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 的差異基因GO富集分析
        3.6.3 CLP-P1 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 的差異基因KEGG富集分析
4 討論
5 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
縮略語表
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Comparative Analysis of Nutrient Composition of Caulerpa lentillifera from Different Regions[J]. ZHANG Meijian,MA Yurong,CHE Xinyi,HUANG Zumei,CHEN Peng,XIA Guanghua,ZHAO Meihui.  Journal of Ocean University of China. 2020(02)
[2]鴻雁雁血多肽的制備及免疫調(diào)節(jié)作用的初步研究[J]. 王錚,趙宇,高曉晨,孫堯,崔本海,高冷.  食品工業(yè)科技. 2020(13)
[3]黃酒多肽的多級分離純化及其對小鼠巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的影響[J]. 馮瑞雪,史瑛,姬中偉,錢肖華,徐岳正,毛健,許正宏.  食品工業(yè)科技. 2020(13)
[4]長裙竹蓀多肽抗氧化及免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 熊川,黃文麗,張利,黎青,李健偉,周賢丹,王玥,朱宇.  食品工業(yè)科技. 2019(24)
[5]肝細(xì)胞生長因子活化JAK2/STAT3通路促進(jìn)巨噬細(xì)胞M1型向M2型極化[J]. 顧奕玥,胡澤平,王云飛,周青,汪淵.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2019(05)
[6]中性粒細(xì)胞產(chǎn)生活性氧在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的研究進(jìn)展[J]. 于濤,范婉,梁飛新.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2019(02)
[7]植物多糖免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 李容,陳華國,周欣.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2018(11)
[8]多肽類藥物對腫瘤免疫調(diào)節(jié)的影響及其機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 杜雙雙,趙紅平,閻昭.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(04)
[9]活性氧與腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 郭文靜,牛小娟,羅曉紅,宋鵬.  西北國防醫(yī)學(xué)雜志. 2018(04)
[10]巨噬細(xì)胞極化[J]. 吳秀華,鄭文潔.  中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志. 2017(02)

博士論文
[1]叉枝松藻抗凝血多糖及其寡糖的制備和結(jié)構(gòu)研究[D]. 李娜.中國海洋大學(xué) 2015

碩士論文
[1]蠶絲蛋白肽免疫調(diào)節(jié)及與化療的聯(lián)合作用[D]. 杜雙雙.天津醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]維生素E對云紋石斑魚幼魚生長、免疫及抗脅迫能力的影響[D]. 張艷亮.上海海洋大學(xué) 2015
[3]海葡萄（Caulerpa lentillifera）切斷組織再生培養(yǎng)及發(fā)育條件研究[D]. 郭輝.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2014
[4]核磁共振在多糖結(jié)構(gòu)解析中的應(yīng)用[D]. 王林強(qiáng).華東師范大學(xué) 2013



本文編號：3173245