糖蛋白是由寡糖鏈與蛋白質(zhì)共價相連而成的分子,而糖鏈?zhǔn)翘堑鞍椎闹匾M成部分,對生命體起著重要的作用。本研究以生姜糖蛋白為研究對象,利用凝集素磁性微粒技術(shù)富集生姜糖蛋白,并在糖苷酶F和糖苷酶A酶解下釋放糖鏈,結(jié)合生物質(zhì)譜技術(shù)深入分析了生姜糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)和糖基化位點,并結(jié)合KEGG通路分析生姜糖蛋白參與的生理活動,以期為生姜糖蛋白的生理功能的研究提供參考。所取得的主要研究結(jié)果如下:1.利用凝集素芯片技術(shù)和磁性微粒篩選并富集生姜糖蛋白。結(jié)果表明,Con A、LCA、LEL、VVA、STL可以與生姜糖蛋白特異性結(jié)合,推測生姜糖蛋白中含有Man,GlcNAc,Fuc以及末端葡萄糖結(jié)構(gòu)。2.MALDI-TOF-MS分析生姜糖蛋白總糖鏈以及Con A、STL分別富集后的生姜糖鏈結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,3種樣品糖鏈結(jié)構(gòu)中復(fù)雜型糖鏈結(jié)構(gòu)居多,且3種樣品中Man,N-GlcNAc,Fuc,Xyl是常見糖型,其中Fuc修飾糖鏈數(shù)量最多。3.LC-MS/MS分析生姜糖肽的糖基化位點,結(jié)合KEGG通路搜索糖肽中蛋白部分所參與的生理功能。結(jié)果表明,生姜糖蛋白具有10個N-糖基化位點,其中6個位點的肽段序列通過數(shù)據(jù)庫搜索發(fā)... 

【文章來源】：渤海大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 文獻綜述
    1.1 生姜的研究概述
    1.2 糖蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.1 蛋白質(zhì)的糖基化
        1.2.2 糖蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 糖鏈的結(jié)構(gòu)
    1.3 糖蛋白的功能
        1.3.1 糖蛋白的生物學(xué)功能
        1.3.2 糖蛋白中糖鏈的功能
    1.4 糖蛋白的研究方法
        1.4.1 糖蛋白的分離純化
        1.4.2 糖蛋白中糖鏈的研究方法
            1.4.2.1 化學(xué)法釋放N-糖鏈
            1.4.2.2 酶法釋放N-糖鏈
        1.4.3 糖鏈的結(jié)構(gòu)分析方法
            1.4.3.1 基質(zhì)輔助激光解析電離
            1.4.3.2 電噴霧電離
    1.5 糖蛋白的研究進展
    1.6 本課題研究目的及內(nèi)容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 主要研究內(nèi)容
2 凝集素芯片富集生姜糖蛋白
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 儀器與設(shè)備
        2.2.3 實驗方法
            2.2.3.1 溶液的配置
            2.2.3.2 生姜糖蛋白的提取
            2.2.3.3 凝集素芯片的制備
            2.2.3.4 凝集素微陣列技術(shù)檢測生姜糖蛋白糖鏈類型
            2.2.3.5 生姜糖蛋白的富集
            2.2.3.6 SDS-PAGE鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 凝集素微陣列檢測生姜糖蛋白糖鏈構(gòu)成
        2.3.2 磁性微粒富集生姜糖蛋白
    2.4 本章小結(jié)
3 生姜糖蛋白糖鏈的結(jié)構(gòu)測定
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 實驗方法
            3.2.3.1 生姜糖蛋白總N-糖鏈的釋放
            3.2.3.2 純化后糖蛋白的N-糖鏈釋放
            3.2.3.3 MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 生姜總糖蛋白的N-糖鏈組成分析
        3.3.2 CON A富集生姜糖蛋白的N-糖鏈組成分析
        3.3.3 STL富集生姜糖蛋白的N-糖鏈組成分析
    3.4 本章小結(jié)
4 生姜糖蛋白的N-糖基化位點分析
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
        4.2.3 實驗方法
            4.2.3.1 主要試劑的配置
            4.2.3.2 生姜糖蛋白的提取
            4.2.3.3 制備糖蛋白溶液
            4.2.3.4 生姜糖蛋白的酶解
            4.2.3.5 釋放N-糖鏈
            4.2.3.6 質(zhì)譜分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 SDS-PAGE分析糖蛋白分子量
        4.3.2 生姜中N-糖基化位點的鑒定結(jié)果分析
        4.3.3 生姜糖蛋白的生物信息
    4.4 本章小結(jié)
5 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
參考文獻
附錄
碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3166923