抗生素自發(fā)現(xiàn)至今,一直被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域,可以治療多種人類(lèi)和動(dòng)物疾病,因此在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛使用甚至造成抗生素的濫用問(wèn)題,導(dǎo)致抗生素在牛奶、雞蛋、豬肉等動(dòng)物源性食品中的殘留問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重。所以建立快速、便捷、靈敏的抗生素殘留檢測(cè)方法對(duì)預(yù)防食品安全問(wèn)題的發(fā)生和保護(hù)人類(lèi)健康具有重要意義。因此,本文針對(duì)食品中殘留危害較為嚴(yán)重的四環(huán)素類(lèi)、青霉素類(lèi)抗生素,建立了以免疫側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)為基礎(chǔ)的三種快速檢測(cè)方法:（1）建立四環(huán)素傳統(tǒng)型免疫層析試紙檢測(cè)方法基于抗原抗體的特異性免疫識(shí)別和毛細(xì)側(cè)向?qū)游鲎饔昧z測(cè)四環(huán)素。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)優(yōu)化了四環(huán)素的標(biāo)記抗體量、K₂CO₃的添加量、封閉劑種類(lèi)和金納米粒子粒徑大小等實(shí)驗(yàn)條件,在最后優(yōu)化好的各關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)參數(shù)下,肉眼觀察到的四環(huán)素檢測(cè)靈敏度為10 ppb,同時(shí)在檢測(cè)濃度為0.2-10 ppb之間建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好。優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)四環(huán)素牛奶實(shí)際樣品的檢測(cè)也同樣適用,不受牛奶基質(zhì)中復(fù)雜成分的影響。（2）建立四環(huán)素預(yù)孵育增敏型免疫層析試紙檢測(cè)方法以傳統(tǒng)的免疫層析試紙為基礎(chǔ),加以改進(jìn),放棄使用金標(biāo)墊,采用目標(biāo)物與金標(biāo)抗體提前... 

【文章來(lái)源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

比色適配體分析法

第一章緒論5電化學(xué)適配體傳感器是通過(guò)電化學(xué)信號(hào)的變化來(lái)監(jiān)測(cè)目標(biāo)物濃度的分析方法，圖1.2所示是一種基于經(jīng)典的絲網(wǎng)印刷金電極建立電化學(xué)適配體傳感器檢測(cè)四環(huán)素的方法[58]，其檢測(cè)原理是通過(guò)循環(huán)伏特安培法得到電化學(xué)信號(hào)值，再通過(guò)監(jiān)測(cè)電化學(xué)信號(hào)值的變化與相對(duì)應(yīng)四環(huán)素濃度之間的關(guān)系實(shí)現(xiàn)樣品中四環(huán)素的定量檢測(cè)，最低檢出限為10nM至微摩爾范圍內(nèi)。圖1.2電化學(xué)適配體分析法Fig1.1Theelectrochemicalaptasensoranalyticalmethod1.2.4免疫分析法免疫分析法的原理是抗原抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后特異性結(jié)合，它是在此基礎(chǔ)上興起的一種檢測(cè)技術(shù)。這種檢測(cè)方法原理簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、檢測(cè)靈敏度高、成本低廉，是目前論文報(bào)道中應(yīng)用最為廣泛的抗生素殘留分析方法。有放射免疫法[59]、酶聯(lián)免疫吸附法[60-61]、熒光免疫法[62-63]等。放射免疫法是最早使用的免疫分析方法，同時(shí)有標(biāo)記同位素的和沒(méi)有標(biāo)記同位素的抗原，兩者同時(shí)與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，利用液體閃爍儀檢測(cè)同位素信號(hào)樣本中的抗生素濃度的一種免疫分析方法。秦燕[64]等研究建立了CharmⅡ放射免疫系統(tǒng)測(cè)定動(dòng)物血清、尿液和組織中殘留的青霉素族抗生素，最低檢出限分別為1000μg/L、200μg/L和50μg/kg;進(jìn)一步檢測(cè)與其他族抗生素?zé)o交叉反應(yīng)。熒光免疫法是先將熒光納米材料標(biāo)記在抗原或抗體表面，然后通過(guò)抗原抗體的免疫反應(yīng)，與其可以識(shí)別的抗體或抗原結(jié)合后，利用肉眼觀察或特定的儀器等來(lái)檢測(cè)目標(biāo)物的濃度[65]。Barberio[66]等利用熒光免疫法檢測(cè)牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，實(shí)現(xiàn)了0.16μg/kg的殘留檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)是基于酶催化其底物反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)和抗原抗體免疫識(shí)別的原理檢測(cè)待測(cè)物的一種方法，具體檢測(cè)時(shí)通過(guò)反復(fù)洗脫，分

底物反應(yīng)形成的顏色來(lái)定性和定量檢測(cè)目標(biāo)物[67]。具體檢測(cè)步驟是先將抗原或抗體固定在酶標(biāo)板表面，然后將抗原或抗體通過(guò)化學(xué)作用與某種酶連接，形成酶標(biāo)抗原或抗體[68]，然后再向酶標(biāo)板中加入連接的這種酶的催化反應(yīng)所需要的底物，由于酶的催化效率極高，所以很快酶標(biāo)板就會(huì)顯色，顯色強(qiáng)度的深淺決定樣品中被檢目標(biāo)物量的多少，最后可根據(jù)酶標(biāo)儀得到酶催化反應(yīng)底物反應(yīng)顏色的強(qiáng)度的具體數(shù)據(jù)，再通過(guò)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以定量分析被測(cè)樣品的含量。此方法的優(yōu)勢(shì)是借助酶催化效率高的優(yōu)點(diǎn)，極大的提高反應(yīng)效率，增強(qiáng)靈敏度。圖1.3所示是Javier[69]等利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)牛奶中的多西環(huán)素，檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.1ng/ml.圖1.3酶聯(lián)免疫法檢測(cè)多西環(huán)素Figure1.3DCDetectionbyELISA上文詳細(xì)敘述了一些基于適配體和免疫反應(yīng)的方法。但這些方法一般都是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，需要嚴(yán)格的反應(yīng)操作條件或需要借助光學(xué)儀器，不適合現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)的開(kāi)展。如熒光適配體傳感器需要對(duì)適配體序列進(jìn)行化學(xué)修飾，或需要熒光來(lái)源，這些材料難獲取并且性質(zhì)不穩(wěn)定；化學(xué)發(fā)光適配體一般反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的光信號(hào)不穩(wěn)定，最后導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確；共振散射適配體傳感器易受溫度、樣品成分的影響，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度不高；電化學(xué)適配體傳感器需要繁復(fù)的電極修飾和電化學(xué)工作站等儀器，要求比較高。放射免疫法的缺點(diǎn)是會(huì)產(chǎn)生放射性污染、處理困難、成本高；熒光免疫法實(shí)際食品樣品檢測(cè)時(shí)背景強(qiáng)，容易對(duì)結(jié)果造成干擾，且技術(shù)程序比較復(fù)雜、熒光易淬滅；酶聯(lián)免疫吸附法需要反復(fù)洗板，洗完板還需要長(zhǎng)時(shí)間的烘板，操作步驟較為繁瑣，并且需要借助光學(xué)儀器來(lái)判讀結(jié)果，檢測(cè)過(guò)程中干擾因素較多導(dǎo)致重復(fù)性不好，以上這些方法的這些缺點(diǎn)導(dǎo)致其應(yīng)用范圍局限于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，不能應(yīng)用于實(shí)時(shí)便捷性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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