抗生素自發(fā)現(xiàn)至今,一直被廣泛應用于醫(yī)療領域,可以治療多種人類和動物疾病,因此在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛使用甚至造成抗生素的濫用問題,導致抗生素在牛奶、雞蛋、豬肉等動物源性食品中的殘留問題越來越嚴重。所以建立快速、便捷、靈敏的抗生素殘留檢測方法對預防食品安全問題的發(fā)生和保護人類健康具有重要意義。因此,本文針對食品中殘留危害較為嚴重的四環(huán)素類、青霉素類抗生素,建立了以免疫側(cè)向?qū)游黾夹g為基礎的三種快速檢測方法:（1）建立四環(huán)素傳統(tǒng)型免疫層析試紙檢測方法基于抗原抗體的特異性免疫識別和毛細側(cè)向?qū)游鲎饔昧z測四環(huán)素。本實驗同時優(yōu)化了四環(huán)素的標記抗體量、K₂CO₃的添加量、封閉劑種類和金納米粒子粒徑大小等實驗條件,在最后優(yōu)化好的各關鍵實驗參數(shù)下,肉眼觀察到的四環(huán)素檢測靈敏度為10 ppb,同時在檢測濃度為0.2-10 ppb之間建立的標準曲線的線性關系良好。優(yōu)化的實驗參數(shù)對四環(huán)素牛奶實際樣品的檢測也同樣適用,不受牛奶基質(zhì)中復雜成分的影響。（2）建立四環(huán)素預孵育增敏型免疫層析試紙檢測方法以傳統(tǒng)的免疫層析試紙為基礎,加以改進,放棄使用金標墊,采用目標物與金標抗體提前... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

比色適配體分析法

第一章緒論5電化學適配體傳感器是通過電化學信號的變化來監(jiān)測目標物濃度的分析方法，圖1.2所示是一種基于經(jīng)典的絲網(wǎng)印刷金電極建立電化學適配體傳感器檢測四環(huán)素的方法[58]，其檢測原理是通過循環(huán)伏特安培法得到電化學信號值，再通過監(jiān)測電化學信號值的變化與相對應四環(huán)素濃度之間的關系實現(xiàn)樣品中四環(huán)素的定量檢測，最低檢出限為10nM至微摩爾范圍內(nèi)。圖1.2電化學適配體分析法Fig1.1Theelectrochemicalaptasensoranalyticalmethod1.2.4免疫分析法免疫分析法的原理是抗原抗體發(fā)生免疫反應后特異性結(jié)合，它是在此基礎上興起的一種檢測技術。這種檢測方法原理簡單、檢測結(jié)果準確、檢測靈敏度高、成本低廉，是目前論文報道中應用最為廣泛的抗生素殘留分析方法。有放射免疫法[59]、酶聯(lián)免疫吸附法[60-61]、熒光免疫法[62-63]等。放射免疫法是最早使用的免疫分析方法，同時有標記同位素的和沒有標記同位素的抗原，兩者同時與抗體發(fā)生競爭性反應，利用液體閃爍儀檢測同位素信號樣本中的抗生素濃度的一種免疫分析方法。秦燕[64]等研究建立了CharmⅡ放射免疫系統(tǒng)測定動物血清、尿液和組織中殘留的青霉素族抗生素，最低檢出限分別為1000μg/L、200μg/L和50μg/kg;進一步檢測與其他族抗生素無交叉反應。熒光免疫法是先將熒光納米材料標記在抗原或抗體表面，然后通過抗原抗體的免疫反應，與其可以識別的抗體或抗原結(jié)合后，利用肉眼觀察或特定的儀器等來檢測目標物的濃度[65]。Barberio[66]等利用熒光免疫法檢測牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺類抗生素，實現(xiàn)了0.16μg/kg的殘留檢測。酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)是基于酶催化其底物反應產(chǎn)生有色物質(zhì)和抗原抗體免疫識別的原理檢測待測物的一種方法，具體檢測時通過反復洗脫，分

底物反應形成的顏色來定性和定量檢測目標物[67]。具體檢測步驟是先將抗原或抗體固定在酶標板表面，然后將抗原或抗體通過化學作用與某種酶連接，形成酶標抗原或抗體[68]，然后再向酶標板中加入連接的這種酶的催化反應所需要的底物，由于酶的催化效率極高，所以很快酶標板就會顯色，顯色強度的深淺決定樣品中被檢目標物量的多少，最后可根據(jù)酶標儀得到酶催化反應底物反應顏色的強度的具體數(shù)據(jù)，再通過數(shù)據(jù)建立標準曲線就可以定量分析被測樣品的含量。此方法的優(yōu)勢是借助酶催化效率高的優(yōu)點，極大的提高反應效率，增強靈敏度。圖1.3所示是Javier[69]等利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測牛奶中的多西環(huán)素，檢測靈敏度達到0.1ng/ml.圖1.3酶聯(lián)免疫法檢測多西環(huán)素Figure1.3DCDetectionbyELISA上文詳細敘述了一些基于適配體和免疫反應的方法。但這些方法一般都是在實驗室內(nèi)進行，需要嚴格的反應操作條件或需要借助光學儀器，不適合現(xiàn)場實時檢測的開展。如熒光適配體傳感器需要對適配體序列進行化學修飾，或需要熒光來源，這些材料難獲取并且性質(zhì)不穩(wěn)定；化學發(fā)光適配體一般反應過程中產(chǎn)生的光信號不穩(wěn)定，最后導致檢測結(jié)果不準確；共振散射適配體傳感器易受溫度、樣品成分的影響，檢測結(jié)果準確度不高；電化學適配體傳感器需要繁復的電極修飾和電化學工作站等儀器，要求比較高。放射免疫法的缺點是會產(chǎn)生放射性污染、處理困難、成本高；熒光免疫法實際食品樣品檢測時背景強，容易對結(jié)果造成干擾，且技術程序比較復雜、熒光易淬滅；酶聯(lián)免疫吸附法需要反復洗板，洗完板還需要長時間的烘板，操作步驟較為繁瑣，并且需要借助光學儀器來判讀結(jié)果，檢測過程中干擾因素較多導致重復性不好，以上這些方法的這些缺點導致其應用范圍局限于實驗室內(nèi)，不能應用于實時便捷性

【參考文獻】：
期刊論文
[1]動物源性食品中抗生素殘留的分類及檢測方法的研究進展[J]. 吳長青,馮俊,沈浥,張玉柱.  食品安全質(zhì)量檢測學報. 2019(21)
[2]基于表面增強拉曼光譜的養(yǎng)殖水中硝基呋喃類抗生素殘留檢測[J]. 李靜,余婉松,夏蘇捷,陳燕,王柯.  食品工業(yè)科技. 2019(24)
[3]動物源性食品中氟喹諾酮類抗生素殘留檢測方法的研究進展[J]. 李妍,閆蕊,王孝研,張寧,顧曉雯.  食品安全質(zhì)量檢測學報. 2019(10)
[4]環(huán)境中抗生素的污染現(xiàn)狀及危害[J]. 李紅燕,陳興漢.  中國資源綜合利用. 2018(05)
[5]食品中抗生素耐藥基因研究進展[J]. 唐惠玲,尹鴻萍.  江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2016(10)
[6]獸用抗生素濫用的危害與合理使用[J]. 梁楠,龐歌.  河南農(nóng)業(yè). 2016(27)
[7]抗生素耐藥基因在畜禽糞便-土壤系統(tǒng)中的分布、擴散及檢測方法[J]. 田甜甜,王瑞飛,楊清香.  微生物學通報. 2016(08)
[8]抗生素殘留對環(huán)境影響的調(diào)查研究[J]. 劉高燕.  化工中間體. 2015(01)
[9]免疫層析試紙技術及其在食品安全檢測中的應用[J]. 李建武,宋春美,劉芳,吳淑燕,李浩林,劉程,邱實,曾海娟,吳嫚,劉箐.  食品科學. 2014(08)
[10]動物性產(chǎn)品中抗生素殘留的原因、危害及檢測方法淺析[J]. 張化民,李慶華,肖文剛.  湖北畜牧獸醫(yī). 2014(01)



本文編號：3111474