【摘要】：柑桔是世界第一大水果,我國柑桔種植面積和產(chǎn)量均居世界第一。但柑桔黃龍病、潰瘍病等檢疫性病害嚴(yán)重威脅我國柑桔業(yè)的發(fā)展。通過葉面噴施或樹干注射抗生素可有效防治柑桔病害。抗生素廣泛用于動(dòng)物疾病防治或作為飼料添加劑用于促進(jìn)動(dòng)物生長,因此其在動(dòng)物源性食品中的殘留問題普遍受到關(guān)注。而抗生素作為農(nóng)藥用于防治植物病蟲害會殘留在農(nóng)產(chǎn)品上,環(huán)境中的抗生素通過作物吸收也會進(jìn)入食品中,植物源性食品中抗生素殘留同樣對人體健康構(gòu)成威脅。但目前對該問題關(guān)注度較低,相應(yīng)的研究也較少。本文建立了分散固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(DSPE/UPLC-MS/MS)快速檢測柑桔中青霉素G及其代謝物青霉二酸和去羧青霉噻唑酸的分析方法,并研究了該3種目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性及在柑桔上的儲藏穩(wěn)定性,同時(shí),在重慶北碚開展2017~2018年兩年田間試驗(yàn),研究了青霉素G在柑桔(宮川溫州蜜柑和紐荷爾臍橙)上的消解動(dòng)態(tài)和最終殘留量,并研究了青霉素G對柑桔果實(shí)營養(yǎng)品質(zhì)的影響。主要研究結(jié)果如下:(1)建立了DSPE/UPLC-MS/MS快速檢測柑桔中青霉素G及其代謝物青霉二酸和去羧青霉噻唑酸的分析方法。樣品經(jīng)80%乙腈提取,C_(18)凈化。目標(biāo)殘留物經(jīng)Acquity UPLC~?HSS T3色譜柱分離,以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,采用正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM),基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果表明,3種殘留物可在5 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效快速分離;在5~2 000μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r~2≥0.9981),方法檢出限(LOD)為0.5~1μg/kg,定量下限(LOQ)為5~10μg/kg。在5~500μg/kg加標(biāo)水平下,青霉二酸和去羧青霉噻唑酸在柑桔中的平均回收率分別為84.8%~103.5%和83.6%~107.4%,RSD分別為3.6%~9.6%和4.3%~9.6%;在10~500μg/kg加標(biāo)水平下,青霉素G在柑桔中的平均回收率為76.7%~101.4%,RSD為3.5%~9.5%。該方法具有良好的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度,適用于柑桔樣品中青霉素G及其兩種代謝物殘留的測定。(2)研究了不同濃度(1、10和100 mg/L)青霉素G及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同溫度(-50、4和25℃)的儲藏穩(wěn)定性,并研究其在柑桔果皮、果肉、全果中的儲藏穩(wěn)定性(-18℃)。結(jié)果表明,青霉素G及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性與溫度和濃度有關(guān),去羧青霉噻唑酸的穩(wěn)定性最高,而青霉素G和青霉二酸較差。濃度對青霉素G的穩(wěn)定性有較大影響,高濃度的青霉素G穩(wěn)定性反而較差。青霉素G及其代謝物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在25、4和-50℃可分別穩(wěn)定存放不超過1、3和120 d。青霉素G及其代謝物在柑桔中可穩(wěn)定存在90~120 d,為準(zhǔn)確測定青霉素G及其代謝物含量,樣品應(yīng)在采后90 d內(nèi)進(jìn)行測定。(3)在宮川溫州蜜柑和紐荷爾臍橙上開展兩年田間試驗(yàn),研究青霉素G在柑桔中的降解代謝行為。消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果表明,青霉素G在柑桔中易降解和代謝,代謝物主要為可長期穩(wěn)定存在的去羧青霉噻唑酸。青霉素G在柑桔中的消解速率快,半衰期短,為1.7~2.7 d,青霉素G在溫州蜜柑(1.7~2.3 d)上的半衰期略小于紐荷爾臍橙(2.0~2.7 d)。最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)柑桔生長至成熟果實(shí)一半大小時(shí),以6 g/L和9 g/L的青霉素G鉀在溫州蜜柑和紐荷爾臍橙上噴霧2~3次,施藥間隔期7 d,距末次施藥7~21 d后,青霉素G(青霉素G+青霉二酸+去羧青霉噻唑酸)的最終殘留量為果皮(0.162~13.376 mg/kg)全果(0.047~7.653mg/kg)果肉(0.015~0.701 mg/kg),其中,果肉中的殘留量要遠(yuǎn)低于果皮;在溫州蜜柑上的殘留量(0.015~4.324 mg/kg)低于紐荷爾臍橙(0.064~16.794 mg/kg)。柑桔中青霉素G及其代謝物的最終殘留量為去羧青霉噻唑酸青霉素G青霉二酸,以去羧青霉噻唑酸為主。結(jié)合最終殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估,青霉素G在紐荷爾臍橙中的殘留膳食慢性風(fēng)險(xiǎn)高于溫州蜜柑,但均較低(RQ_c1.265%),遠(yuǎn)小于100%,處于可接受水平范圍內(nèi)。(4)以6 g/L和9 g/L的青霉素G鉀在宮川溫州蜜柑和紐荷爾臍橙上噴霧3次,每次施藥間隔期7 d,研究了青霉素G對柑桔果實(shí)品質(zhì)的影響。結(jié)果表明,青霉素G對柑桔果實(shí)不同品質(zhì)指標(biāo)影響不同。具體而言,在p0.05的顯著性水平下,施用青霉素G可顯著提高柑桔果實(shí)可溶性固形物(TSS)、還原糖含量,同時(shí)可顯著降低維生素C和溫州蜜柑中總類黃酮含量,而對紐荷爾臍橙中總類黃酮含量無顯著影響。此外,對于可滴定酸(TA)和固酸比以及果實(shí)外觀品質(zhì)如可食率、出汁率和果型指數(shù)等無顯著性影響。根據(jù)本文研究結(jié)果,可得出以下結(jié)論:(1)建立了DSPE/UPLC-MS/MS檢測柑桔中青霉素G及其代謝物青霉二酸和去羧青霉噻唑酸的分析方法,該方法準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度良好,適用于柑桔樣品中青霉素G及其兩種代謝物殘留的測定。(2)青霉素G及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液在25、4和-50℃下穩(wěn)定期分別為1、3和120 d,在柑桔中可穩(wěn)定存在90~120 d(-18℃)。(3)青霉素G在柑桔中易降解代謝,半衰期為1.7~2.7 d,代謝物主要是可長期穩(wěn)定存在的去羧青霉噻唑酸;青霉素G及其代謝物在柑桔中主要?dú)埩粲诠ぶ?其殘留膳食慢性風(fēng)險(xiǎn)較低,處于可接受水平范圍內(nèi)。(4)青霉素G對柑桔果實(shí)不同品質(zhì)指標(biāo)影響不同。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS255.7

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本文編號：2722055