【摘要】：醪糟是我國的傳統(tǒng)發(fā)酵食品,目前醪糟的種類日益豐富,滿足不同人群的需求,并且由于醪糟酒精度低、營養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特等特點(diǎn),極大地促進(jìn)了醪糟行業(yè)的發(fā)展。燕麥醪糟中含有多糖等生物活性成分,免疫調(diào)節(jié)活性被公認(rèn)為是多糖最重要的生物活性。本文系統(tǒng)研究了燕麥醪糟制作工藝的優(yōu)化、多糖提取、脫蛋白工藝優(yōu)化;結(jié)合兩種多糖分離方法DEAE Sepharose-FF陰離子交換柱和Superdex G-100凝膠柱進(jìn)行多糖分離純化,采用高效凝膠滲透色譜法測定分子量,采用氣相色譜法測定單糖組成,FT-IR對多糖進(jìn)行紅外光譜掃描,通過一維、二維NMR解析了燕麥醪糟多糖的結(jié)構(gòu),同時評價了燕麥醪糟多糖的體外抗氧化、對結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo細(xì)胞的生長影響以及體外免疫調(diào)節(jié)等作用。主要研究結(jié)果如下:1、利用不同粒度的燕麥、黃米進(jìn)行發(fā)酵制成醪糟產(chǎn)品,通過對其總糖、還原糖、多酚含量、總抗氧化性、pH值、感官評定的測定得出80 目的燕麥、黃米發(fā)酵醪糟為最佳。通過單因素實(shí)驗(yàn)確定最佳的料液比為1:3、燕麥與黃米添加比例為3:7、加曲量為8%。2、在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過正交試驗(yàn)設(shè)計,確立了燕麥醪糟多糖的最佳醇沉工藝參數(shù):乙醇濃度為85%、醇沉pH值為8、醇沉?xí)r間為20 h,此條件下多糖的提取量為 11.09 g/L。3、在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過正交試驗(yàn)設(shè)計,確立了燕麥醪糟粗多糖的Sevage法脫蛋白最佳工藝條件:Sevage試劑與多糖溶液的體積比為3:2,氯仿與正丁醇體積比為5:1,振搖時間為20 min,除蛋白次數(shù)2次。4、采用DEAE-Sepharose FF色譜柱和Superdex G-100凝膠對燕麥粗多糖進(jìn)行分離純化,其洗脫最佳流速為1.0mL/min、最佳洗脫濃度梯度為0→0.2mol/L→0.4 mol/L→0.6 mol/L NaCl緩沖液進(jìn)行沖洗,上樣最佳濃度為10 mg/mL。在最終擴(kuò)大緩沖液濃度至2.0 mol/LNaCl后得到三種白色的燕麥醪糟多糖組分LCPS-1、LCPS-2、LCPS-3;經(jīng)過Superdex G-100凝膠再次純化后只有LCPS-2的HPGPC洗脫峰呈單一、對稱正態(tài)分布,并且測得多糖組分LCPS-2是分子量為49.99 KDa的高純度多糖組分。通過單糖組成分析,阿拉伯糖、木糖、半乳糖是構(gòu)成LCPS-2的主要組分,并含有少量葡萄糖和甘露糖。NMR 證明,LCPS-2 中含→5)-α-L-Araf-(l→α-L-Araf-(1→3,6)-β-D-Galp-(1→的多糖片段。5、燕麥醪糟多糖組分的體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明,抗氧化性強(qiáng)弱順序?yàn)?LCPS-2LCPS-1粗多糖。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),隨著燕麥醪糟多糖濃度的增加,DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力及總抗氧化力逐漸增強(qiáng),其中LCPS-2對DPPH自由基清除能力最強(qiáng)。當(dāng)LCPS-2濃度達(dá)到600μg/mL時,對DPPH自由基、羥基自由基和總抗氧化力分別達(dá)到90%、31%和20.6 U/mL。選擇抗氧化能力最強(qiáng)的LCPS-2在體外與結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo細(xì)胞共同培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)LCPS-2對于Lovo細(xì)胞生長沒有抑制作用。6、LCPS-2的免疫活性評價結(jié)果表明,LCPS-2在50～400 μg/mL范圍內(nèi)能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)均能增強(qiáng)對中性紅吞噬能力,提高NO分泌含量(P0.01)。LCPS-2各濃度組對小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、IFN-y水平、NK細(xì)胞殺傷活性均高于空白對照組(P0.05);LCPS-2濃度為200 μg/mL時,小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中的CD3+亞群水平明顯升高(P0.05),CD4+、CD8+亞群水平升高不顯著。
【圖文】：

圖２－１多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－Ｉ邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ逡逑

圖２－２葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ｇｌｕｃｏｓｅ逡逑
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TS262.4;TS201.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2626272