發(fā)布時間：2020-04-03 04:36

【摘要】：牛奶可以為人體提供大量營養(yǎng)物質(zhì),但其中也存在很多致病微生物。合適的巴氏殺菌工藝可以殺滅牛奶中的致病微生物,也可以保持營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。牛奶中的堿性磷酸酶和乳過氧化物酶活性就可以用于巴氏殺菌乳熱處理加工工藝的評價。但目前國內(nèi)關于堿性磷酸酶的檢測標準NY/T 801-2004操作繁瑣、耗時長、靈敏度低,已經(jīng)不能滿足乳品生產(chǎn)過程對衛(wèi)生安全控制的需求,同時,也尚無關于乳過氧化物酶活性的檢測標準。因此,本試驗針對ISO 22160-2007中檢測堿性磷酸酶活性的方法進行了評估,也對商品化試劑盒(Evergreen TERA~(TM))檢測乳過氧化物酶活性的方法進行了評估,為之后新的行業(yè)標準的制定提供數(shù)據(jù)基礎;同時本試驗利用兩種方法研究了不同熱處理條件下巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶和乳過氧化物酶活性的變化,對巴氏殺菌工藝的評價方法提供依據(jù)。本試驗還檢測了市售巴氏殺菌乳中兩種酶的活性,為牛奶加工生產(chǎn)和牛奶質(zhì)量評價提供一定的數(shù)據(jù)基礎。主要試驗內(nèi)容和結(jié)果如下:堿性磷酸酶活性檢測方法的優(yōu)化與評估:本方法優(yōu)化了ISO 22160-2007中的方法,對方法的儀器選擇性、基質(zhì)選擇性、干擾影響和樣品穩(wěn)定性進行檢測,結(jié)果表明該方法可用于巴氏殺菌乳堿性磷酸酶活性的檢測。同時對該方法的檢出限、線性關系、回收率、日間日內(nèi)差異、重復性、再現(xiàn)性均進行驗證與評估,結(jié)果表明:檢出限測定結(jié)果為18.4 mU/L,與方法中規(guī)定20 mU/L一致;生鮮乳含量與堿性磷酸酶活性0.00~1.00%范圍內(nèi)呈良好線性關系,回歸方程y=10~6x 85.068,相關系數(shù)R~2=0.9971。回收率范圍85.3%~105.6%,相對標準偏差范圍2.5%~22.1%;日內(nèi)差異相對標準偏差為9.4-10.7%,日間差異相對標準偏差為10.7%;同時在三家具有資質(zhì)的檢測單位中進行比對驗證,各比對驗證單位測試結(jié)果顯示堿性磷酸酶活性的重復性限r(nóng)與再現(xiàn)性R均呈良好的結(jié)果。本試驗同時也建立了關于樣品確證的方法以排除檢測結(jié)果假陽性的可能,也進行了與農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T801-2004的對比,結(jié)果表明本方法更靈敏、快捷、準確。乳過氧化物酶活性檢測方法的評估:本方法對成熟的商品化試劑盒(Evergreen TERA~(TM))進行評估,結(jié)果表明:該方法檢出限可低至2.83U/L,在0-400 U/L范圍內(nèi)有著良好的回歸關系,R~2達到0.998,。加標回收率范圍可達99.2%~108.1%,相對標準偏差范圍4.5%~17.2%,說明該試劑盒有很好的準確性。此外,檢測時不同的基質(zhì)對檢測結(jié)果也不會產(chǎn)生影響,但是樣品保存時間過長會使得檢測結(jié)果偏低。堿性磷酸酶和乳過氧化物酶活性檢測方法的應用:本試驗對不同熱處理下巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶和乳過氧化物酶活性的變化進行探究,同時也對市售巴氏殺菌乳中兩種酶活性進行檢測,進而對國內(nèi)巴氏殺菌工藝做出評價。結(jié)果表明:隨著熱處理溫度升高,巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶和乳過氧化物酶活性溫度會降低;其中,堿性磷酸酶失活條件為72℃15s,乳過氧化物酶失活條件為75-80℃15s;市售巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶普遍為陰性,大部分樣品中乳過氧化物酶都失活,只有少數(shù)樣品可以檢測到活性,說明我國乳品巴氏殺菌工藝存在過度熱處理、熱加工等現(xiàn)象,仍需規(guī)范。
【圖文】：

圖 1.1 比色法的基本原理Figure 1.1 The principle of colorimetric method些比色法的研究使用了其他的底物。Aschaffenburg 等以對硝性磷酸酶作用下催化生成黃色的硝基酚，相較于苯酚法此方額外的培養(yǎng)時間[28]。Babson 等則利用酚酞單磷酸環(huán)己胺鹽作測定反應生成的酚酞，此方法的優(yōu)點是產(chǎn)物更為穩(wěn)定[29]。比色一定的缺陷，如：反應操作繁瑣，需要檢測時間過長，檢出限熒光法 等第一次提出用熒光法測定牛堿性磷酸酶[30]。熒光法的原理磷酸酶的催化作用下生成強熒光物質(zhì)，通過測定熒光吸光度來活性，經(jīng)典的熒光法采用的底物有：4-甲基傘形酮磷酸酯，，素等。1990 年，Rocco 開發(fā)了以 2-(2-苯并咪唑基)-6-強本熒光法，此底物在 38℃下，由堿性磷酸酶催化生成強熒光物

乳及乳制品中堿性磷酸酶和乳過氧化物酶比色法和熒光法，它的原理是測定底活性，目前化學發(fā)光法用到的底物是PPD），發(fā)光產(chǎn)物為 1,2-二氧環(huán)己烷酸酶檢測物。發(fā)光法反應時間快，靈同的是，化學發(fā)光法也逐漸形成了一nces Inc.），Salter 聯(lián)合多個實驗室，效的檢測巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶推薦的測定乳品中堿性磷酸酶活性
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TS252.7

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本文編號：2612945