辣椒(Capsicum annuum L.)是一種受人們喜愛的蔬菜,在全世界范圍內(nèi)廣泛種植。辣椒疫病由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起,在辣椒的整個生長階段都有可能發(fā)生,可導致成片辣椒死亡,嚴重影響了辣椒的生產(chǎn)。實踐證明,明確作物的抗病基因并用于選育抗病品種,才能從根本上預防某種病害的發(fā)生。本實驗室前期研究結果顯示,Ca21394為辣椒抗疫病的候選基因,但未進行功能驗證;病毒誘導的基因沉默(VIGS)是一種快速沉默目的基因的方法,正在越來越多地用于植物候選基因的功能分析。本研究以辣椒抗疫病材料’G43’為試驗材料,利用VIGS技術,分析Ca21394是否參與辣椒對辣椒疫霉菌的抗性反應。研究結果如下:構建了 VIGS重組載體pTRV2:Ca21394。采用對寄主影響較溫和的煙草脆裂病毒(TRV)為病毒載體,以辣椒葉片DNA為模板,在Ca21394基因序列5’端的一個外顯子區(qū)域內(nèi)設計引物,克隆得到大小為438 bp的目的片段,經(jīng)過雙酶切檢測、測序驗證序列正確后,在pTRV2載體的XbaI和BamHI雙酶切位點間插入該目的片段,完成pTRV2:Ca21394重組載體...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?Ｇ４３葉片ＤＮＡ提取電泳檢測??

２．２．１辣椒葉片ＤＮＡ提取??按照ＤＮＡ提取試劑盒的操作步驟，提取抗疫病材料‘Ｇ４３’的辣椒葉片ＤＮＡ，??并進行電泳檢測，結果如圖２－１所示，得到清晰的條帶，表明已經(jīng)得到所需的ＤＮＡ，??可用其進行下一步實驗。??Ｍ?１?２?３??２０００?ｂｐ??７５０?ｂｐ??圖２－１?....

圖２－３目的片段與ｐＥＡＳＹ－Ｔ３載體連接轉化后ＰＣＲ檢測??

??片ＤＮＡ為模板進行ＰＣＲ擴增，電泳檢測結果顯示５００?ｂｐ下方有清晰的條帶（圖２－２），??與預期結果一致。測序結果表明，目的片段與Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即該目的片段不包含內(nèi)含子，可用于下一步的重組載體構建。??Ｍ?１?２?３??圖２－２?Ｃａ２１３....

圖２－２?Ｃａ２１３９４基因擴增電泳檢測??

??片ＤＮＡ為模板進行ＰＣＲ擴增，電泳檢測結果顯示５００?ｂｐ下方有清晰的條帶（圖２－２），??與預期結果一致。測序結果表明，目的片段與Ｃａ２１３９４的ＣＤＳ序列同源片段完全一??致，即該目的片段不包含內(nèi)含子，可用于下一步的重組載體構建。??Ｍ?１?２?３??圖２－２?Ｃａ２１３....

圖２－５?ｐＴＲＶ２和目的片段質粒提取電泳檢測??

活化含ｐＴＲＶ２質粒的大腸桿菌，利用ｐＴＲＶ２－Ｆ／Ｒ引物進行ＰＣＲ擴增檢測，得到??的條帶大小應為２８１?ｂｐ，電泳檢測結果表明，在２００?ｂｐ條帶上方可看到單一清晰的條??帶（圖２－４），與預期結果一致，說明ｐＴＲＶ２質�？梢杂糜诤罄m(xù)試驗。??Ｍ?１?２?３?４??ｊｍ??圖....

本文編號：3988436