匍匐翦股穎(Agrostis stolonifera)屬多年生草本植物,廣泛分布于寒帶、溫帶及亞熱帶地區(qū),是重要的城市綠化植被及造景材料。在全球氣候變暖的環(huán)境下,高溫脅迫成為限制匍匐翦股穎生長的重要逆境因素。MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源非編碼、單鏈小分子RNA,它通過轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制或剪切降解等途徑負調(diào)控其對應(yīng)靶基因的表達,參與了多種生理活動過程,其中包括對干旱、冷害、鹽脅迫等逆境的響應(yīng)。本研究以耐熱型匍匐翦股穎草坪草品種PennA4為材料,采用新一代高通量測序技術(shù),分析了PennA4高溫脅迫處理組(HS)和對照組(C)兩個小RNA文庫,共鑒定獲得192個保守的成熟niRNA序列,其中84個為高溫響應(yīng)miRNA成熟序列,相對表達差異最高達近7倍。進一步二級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析,鑒定得到10個新miRNA成熟序列,其中4個為高溫響應(yīng)miRNA。熒光實時定量PCR分析了15個高溫響應(yīng)miRNA在高溫脅迫過程中的表達,呈現(xiàn)持續(xù)升高、持續(xù)下降、先升后降或先降后升4種模式。對高溫響應(yīng)miRNA進行靶基因預(yù)測,GO基因功能注釋顯示,相關(guān)基因功能主要涉及生物過程、細胞組分和分子功能3個大分支和41...

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【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
1. 引言
    1.1. 植物高溫抗性研究
        1.1.1. 高溫危害
        1.1.2. 植物高溫響應(yīng)生理生化機制
        1.1.3. 植物高溫響應(yīng)分子機制
    1.2. 植物miRNA研究
        1.2.1. miRNA的發(fā)現(xiàn)和合成
        1.2.2. miRNA作用機制
        1.2.3. miRNA功能
    1.3. 植物高溫響應(yīng)miRNAs
    1.4. 草坪草miRNA研究
    1.5. 立項依據(jù)及研究目的
    1.6. 技術(shù)路線
2. 材料與方法
    2.1. 植物材料
    2.2. 總RNA的提取和檢測
    2.3. 小RNA的提取及檢測
        2.3.1. small RNA的提取
        2.3.2. small RNA的Poly(A)加尾
        2.3.3. small RNA第一鏈cDNA合成及檢測
    2.4. 小RNA文庫的構(gòu)建和高通量測序
    2.5. 小分子RNA生物信息學(xué)分析
        2.5.1. 初級分析
        2.5.2. sRNAs注釋
    2.6. 高溫響應(yīng)miRNA鑒定
    2.7. 高溫響應(yīng)miRNA靶基因預(yù)測及功能分析
        2.7.1. 高溫響應(yīng)miRNA靶基因預(yù)測
        2.7.2. 高溫響應(yīng)miRNA靶基因功能分析
    2.8. 高溫響應(yīng)miRNA與靶基因表達模式分析
3. 結(jié)果與分析
    3.1. 小RNA的提取
    3.2. 小RNA高通量測序
        3.2.1. 小RNA分析
        3.2.2. 小RNA長度分布統(tǒng)計
        3.2.3. 小RNA分類
    3.3. 匍匐翦股穎miRNA鑒定
        3.3.1. 匍匐翦股穎保守miRNA的鑒定
        3.3.2. 匍匐翦股穎中新miRNA的預(yù)測
    3.4. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA靶基因的預(yù)測與通路分析
        3.4.1. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA鑒定
        3.4.2. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA靶基因預(yù)測
        3.4.3. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA靶基因通路分析
    3.5. 高溫響應(yīng)miRNA與靶基因表達模式分析
        3.5.1. 高溫響應(yīng)miRNA表達模式分析
        3.5.2. 高溫響應(yīng)miRNA靶基因表達模式分析
4. 討論
    4.1. 匍匐翦股穎小RNA組成及高溫響應(yīng)特征
    4.2. 匍匐翦股穎保守miRNA
    4.3. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA
    4.4. 匍匐翦股穎高溫響應(yīng)miRNA、靶基因與通路分析
5. 結(jié)論與展望
參考文獻
附圖
個人簡介
導(dǎo)師簡介
獲得成果目錄
致謝



本文編號：3961041