柿(Diospyros kaki)一般分為澀柿和甜柿,主栽品種多為澀柿,采后須經(jīng)人工脫澀后才能食用。本文以4個(gè)澀柿品種(’磨盤柿’、’鏡面柿’、‘刀根早生’、’恭城水柿’)為材料,通過采后AHCA處理(95%CO2+1%O2,常稱為高CO2處理)脫澀,利用RNA-seq數(shù)據(jù)分析和DkPDC2(關(guān)鍵靶標(biāo)基因之一)啟動(dòng)子篩庫實(shí)驗(yàn),鑒別了介入柿果實(shí)采后脫澀的轉(zhuǎn)錄因子,并解析它們的作用機(jī)制,進(jìn)一步豐富柿果實(shí)采后脫澀的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。主要結(jié)果如下:1.基于轉(zhuǎn)錄組,發(fā)現(xiàn)了參與柿果實(shí)采后脫澀的DkMYB/DkERF轉(zhuǎn)錄級聯(lián)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)AHCA處理能夠誘導(dǎo)柿果實(shí)乙醇乙醛的積累,進(jìn)而導(dǎo)致可溶性單寧含量的降低,實(shí)現(xiàn)柿果實(shí)脫澀。通過RNA-seq篩選并通過實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證得到柿果實(shí)采后脫澀過程中9個(gè)受AHCA處理誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)一步通過雙熒光素酶體系和酵母單雜交以及點(diǎn)突變技術(shù),發(fā)現(xiàn)DkMYB10可以直接結(jié)合DkERF9啟動(dòng)子并誘導(dǎo)其活性,DkERF21和DkERF22可以間接激活DkERF10啟動(dòng)子活性,DkERF18、DkERL19和DkMYB6可以直接結(jié)合DkERF19啟動(dòng)子并激活其活性,果實(shí)圓...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２．１?ＡＨＣＡ處理對‘磨盤柿’果實(shí)采后脫澀的影響（２０?°Ｃ）??（Ａ）單寧印跡分析，顏色越深表明可溶性單寧含量越高；（Ｂ）可溶性單寧含量；（Ｃ）乙醛??

ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?Ｓ．Ｅ．ｓ?ｆｒｏｍ?ｔｈｒｅｅ?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．??約為６５８倍和４８９倍。在‘刀根早生’中，同樣只有Ｄ妨表達(dá)受到強(qiáng)烈誘??導(dǎo)，Ｉｄ時(shí)達(dá)到了?９３５倍（圖２．２）。與之相反，其余５個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)并不能??被ＡＨＣＡ處理顯著誘導(dǎo)（....

圖２．３?ＡＨＣＡ響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子對和ＺＭＰＤＣ２啟動(dòng)子的調(diào)控效應(yīng)??將空載體和啟動(dòng)子混合的ＬＵＣ／ＲＥＮ設(shè)為１，誤差線代表５次生物學(xué)重復(fù)??

因子的ＳＫ表達(dá)載體構(gòu)建，在煙草中開展了對和￡）ｙｔＰＺＸ：２啟動(dòng)子的雙??熒光素酶檢測試驗(yàn)。結(jié)果表明，９個(gè)轉(zhuǎn)錄因子對和尸ＤＣ２啟動(dòng)子均??無明顯的調(diào)控作用（ＬＵＣ／ＲＥＮ＜２．０）（圖２．３）。??３ｉ???＋ＤｋＡＤＨ?１?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??２????—?Ｉ??ｉ?１?＿?ｎ....

圖２．４瓜￡：及Ｆ９和對ＺＭＰＺＪＣ２啟動(dòng)子的協(xié)同增效效應(yīng)??ＬＵＣ／ＲＥＮＩ，代５

調(diào)控ＤｋＥＲＦ９啟動(dòng)子活性（約２Ｊ倍）；ＤｋＥＲＦ２！和Ｄｋ￡ＲＦ２２能誘導(dǎo)Ｄｋ￡ＲＦ�。�??啟動(dòng)子活性（分別約為２．３和２．０倍），而Ｄ狀和以及能??夠轉(zhuǎn)錄調(diào)控啟動(dòng)子活性（分別約為２．１、２．２和３．７倍）（圖２．５）。進(jìn)一??步分祈?ＤｋＥＲＦ２１?和?ＤｋＥＲＦ２２?對?Ｄ....

圖２．５?ＡＨＣＡ響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子對ＺＷ正／？Ｆ９／／ｆｔ／／９啟動(dòng)子的調(diào)控效應(yīng)??和／＾Ａ／ｒａ５４分別由Ｍｉｎ等（２０１２）和Ｆａｎｇ等（２０１６）克隆和構(gòu)建載體

過酵母單雜交體系發(fā)現(xiàn)ＤｋＭＹＢｌＯ可以直接結(jié)合啟動(dòng)子序列，而不能結(jié)??合元件（ＭＢＳＩＩ元件ＡＣＣＡＡＣ，突變?yōu)椋裕茫茫裕裕茫┩蛔兒蟮膯?dòng)子??序列（圖２．６Ａ）；煙草雙熒光素酶體系研究發(fā)現(xiàn)，ＤＭ／７Ｂ川對點(diǎn)突變??２３??

本文編號(hào)：3902348