我國傳統(tǒng)名花之一的中國水仙(Narcissus tazetta L.Var.chinensis Roem.),為多年生石蒜科多花水仙鱗莖植物的栽培變種,也是福建省的特色花卉。水仙花具有傘型花序,其花葶(花柱)著生多朵小花,與歐洲水仙形成鮮明對照。水仙花小花壽命一般為3-4天,花序頂部順序開放,在開花過程中花葶需要從源器官輸入足量的碳水化合物(蔗糖)及其他的營養(yǎng)成分來提供碳骨架及能量,完成小花開放、香氣合成及生殖細胞發(fā)育和種子形成等過程。而蔗糖不僅是能量的載體,也作為信號分子參與調(diào)節(jié)花的形成、發(fā)育以及生殖過程。為了深入了解水仙花發(fā)育過程糖運輸相關的分子機制和遺傳控制,我們對一類重要的糖運輸?shù)鞍譙WEET基因家族進行了研究。主要研究內(nèi)容及結果如下:1.利用熒光定量PCR技術,對水仙花芽分化及開花過程中SWEET糖轉運蛋白基因進行表達量水平分析。實驗結果表明越靠近鱗莖內(nèi)部Nt SWEET14和15基因的表達量相應下降,Nt SWEET1a、1b、4b和13則逐步升高,而這些基因在水仙開花開放的四個階段中也都同樣呈現(xiàn)出特定的表達模式。相較于其他SWEET基因,無論在副冠中還是在花被片中Nt S...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 水仙花鱗莖膨大機理及其儲藏功能
    1.3 水仙花開花性狀的分子機理研究進展
    1.4 SWEET糖運輸?shù)鞍椎难芯楷F(xiàn)狀
        1.4.1 SWEET基因的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 SWEET蛋白結構特征
        1.4.3 SWEET基因家族的功能
    1.5 本研究的內(nèi)容及意義
第二章 水仙SWEET家族基因的表達水平分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物種植和樣品采集
        2.1.2 儀器及用具
        2.1.3 試劑
    2.2 方法
        2.2.1 轉錄組中SWEET同源基因序列的表達動態(tài)分析
        2.2.2 Nt SWEET家族基因生物信息學分析
        2.2.3 總RNA提取及c DNA第一條鏈的合成
        2.2.4 Nt SWEET家族基因q PCR引物設計及特異性檢測
        2.2.5 實時熒光定量qPCR反應體系和程序
        2.2.6 實時熒光定量PCR數(shù)據(jù)處理
    2.3 結果與分析
        2.3.1 Nt SWEET家族基因表達動態(tài)及分子進化樹的分析
        2.3.2 總RNA的提取
        2.3.3 水仙花SWEET基因在不同組織部位的表達分析
    2.4 討論
第三章 水仙SWEET糖轉運蛋白家族基因的過表達載體構建
    3.1 材料
        3.1.1 實驗試劑及儀器
        3.1.2 載體及菌株
    3.2 方法
        3.2.1 引物設計
        3.2.2 目的基因片段的克隆和回收
        3.2.3 Gateway技術構建雙元表達載體
        3.2.4 重組表達載體單克隆的檢測
        3.2.5 重組子質粒提取及保菌
        3.2.6 凍融法轉化農(nóng)桿菌GV3101
        3.2.7 過表達重組載體質粒轉化農(nóng)桿菌
        3.2.8 陽性轉化菌株的鑒定及保菌
    3.3 結果與分析
        3.3.1 Nt SWEETs基因的克隆與分析
        3.3.2 目的片段連接入門載體
        3.3.3 LR反應構建目的表達載體
        3.3.4 重組質粒轉化GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
    3.4 討論
第四章 水仙SWEET糖轉運蛋白家族成員的亞細胞定位分析
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 儀器和試劑
        4.1.3 實驗所需溶液的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 本氏煙草的種植
        4.2.2 煙草葉片的侵染與取樣
        4.2.3 煙草葉片侵染液的配制
        4.2.4 臨時裝片的制備
    4.3 結果與分析
    4.4 討論
第五章 水仙SWEET糖轉運蛋白基因的酵母互補表達載體構建及功能驗證
    5.1 材料
    5.2 試劑與儀器
        5.2.1 實驗試劑
        5.2.2 實驗儀器
    5.3 方法
        5.3.1 引物序列的設計
        5.3.2 從連接目的基因的質粒中擴增片段
        5.3.3 目的基因片段的酶切純化及有膠回收
        5.3.4 表達載體p DRTXa-Nt SWEET的構建
        5.3.5 陽性菌株的篩選檢測
        5.3.6 培養(yǎng)與轉化酵母所需培養(yǎng)基的配制
        5.3.7 重組載體質粒轉化酵母菌株EBYVW4000感受態(tài)細胞
        5.3.8 酵母重組表達載體p DRTXa-Nt SWEET對不同糖底物轉運吸收功能
    5.4 結果與分析
        5.4.1 pDRTXa-Nt SWETs酵母功能互補表達載體構建
        5.4.2 Nt SWEET基因在酵母底物吸收互補中的功能
    5.5 討論
第六章 水仙離體培養(yǎng)研究及愈傷組織中SWEET基因的表達分析
    6.1 材料
    6.2 試劑與儀器
        6.2.1 試劑
        6.2.2 儀器及用具
    6.3 方法
        6.3.1 外植體的預處理和消毒
        6.3.2 中國水仙離體組織再生培養(yǎng)條件的篩選
        6.3.3 數(shù)據(jù)計算分析
        6.3.4 水仙SWEET基因家族在不同階段愈傷組織的表達變化
    6.4 結果與分析
        6.4.1 水仙外植體消毒條件的探索及污染、褐化情況
        6.4.2 水仙愈傷組織的誘導增殖和不定芽分化
        6.4.3 鱗莖片愈傷組織的誘導和分化
        6.4.4 子房愈傷組織的誘導和分化
        6.4.5 水仙不同愈傷組織階段中SWEET基因家族成員的表達特征
    6.5 討論
第七章 總結與展望
    7.1 主要結論
    7.2 展望
參考文獻
致謝



本文編號：3875076