CaSGT1和GaSRC2-1互作及其在PcINF1/CaSRC2-1激活辣椒免疫反應(yīng)中的作用分析
發(fā)布時間:2023-12-10 10:46
前期本實驗室從辣椒疫霉cDNA文庫中分離獲得了一個elicitin家族成員PcINF1的全長cDNA,發(fā)現(xiàn)該蛋白可與辣椒SRC2-1蛋白結(jié)合,促發(fā)辣椒葉片產(chǎn)生HR(hypersensitive response)細胞壞死,并使辣椒防御反應(yīng)相關(guān)標記基因上調(diào),但是其內(nèi)在機制并不清楚。本研究在此基礎(chǔ)上進一步分析發(fā)現(xiàn)CaSGT1參與PcINF1/CaSRC2-1誘導(dǎo)的免疫反應(yīng):通過酵母雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CaSRC2-1與CaSGT1之間存在互作,并進一步通過雙分子熒光互補(BiFC)和免疫共沉淀分析(co-IP)得到證實。在辣椒植株葉片上接種疫霉,或同時瞬間表達PcINF1/CaSRC2-1可使CaSGT1的轉(zhuǎn)錄表達顯著上調(diào),病毒介導(dǎo)CaSGT1沉默(CaSGT1-VIGS)可顯著降低PcINF1/CaSRC2-1瞬間表達激活的辣椒葉片細胞HR壞死、H2O2積累、防御反應(yīng)相關(guān)標記基因轉(zhuǎn)錄表達的上調(diào),且CaSGT1和CaSRC2-1共同沉默比其中任何一個基因單獨沉默更能降低接種疫霉導(dǎo)致的HR細胞壞死和防御反應(yīng)相關(guān)基因表達。此外,還發(fā)現(xiàn)CnSGT1和cnSRC2-1沉默能降低彼此瞬間表達激活的HR反應(yīng)...
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
1 前言
1.1 SGT1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
1.2 C2功能域的研究與進展
1.3 SRC2-1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
1.4 elicitin的研究進展
1.5 本項目研究的意義
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.2 實驗方法
2.2.1 植物材料和病原體侵染
2.2.2 辣椒總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
2.2.3 實時定量PCR分析
2.2.4 雙分子熒光互補(BiFC)分析
2.2.5 構(gòu)建Gateway相容LUC載體和測LUC活性
2.2.6 GUS酶活測定
2.2.7 酵母雙雜交分析
2.2.8 免疫共沉淀(co-IP)分析
2.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬間超表達和亞細胞定位分析
2.2.10 病毒介導(dǎo)的基因沉默(VIGS,virus induced gene silence)
2.2.11 電導(dǎo)率測定
2.2.12 DAB和臺盼藍染色
3 結(jié)果及分析
3.1 CaSGT1與CaSRC2-1互作
3.2 CaSGT1在應(yīng)對辣椒疫霉接種時的轉(zhuǎn)錄表達
3.3 在辣椒中將CaSGT1和CaSRC2-1基因共同沉默與單個基因沉默相比在抵御辣椒疫霉的免疫反應(yīng)中有很大程度上的減弱
3.4 在辣椒中瞬間共表達CaSGT1和CaSRC2-1使得細胞壞死和防御反應(yīng)增強
3.5 用VIGS和瞬間超表達相結(jié)合的方式分析CaSGT1和CaSRC2-1在辣椒免疫誘導(dǎo)中的作用
3.6 CaSGT1在應(yīng)對PcINF1/CaSRC2-1瞬間共表達時的轉(zhuǎn)錄表達
3.7 CaSGT1沉默后使得PcINF1/CaSRC2-1激發(fā)的免疫反應(yīng)減弱
3.8 CaSGT1沉默對PcINF1/CaSRC2-1互作的影響
3.9 PcINF1瞬間超表達和疫霉接種對CaSRC2-1/CaSGT1互作的影響
4 討論
參考文獻
附錄
致謝
本文編號:3872361
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
1 前言
1.1 SGT1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
1.2 C2功能域的研究與進展
1.3 SRC2-1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
1.4 elicitin的研究進展
1.5 本項目研究的意義
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.2 實驗方法
2.2.1 植物材料和病原體侵染
2.2.2 辣椒總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
2.2.3 實時定量PCR分析
2.2.4 雙分子熒光互補(BiFC)分析
2.2.5 構(gòu)建Gateway相容LUC載體和測LUC活性
2.2.6 GUS酶活測定
2.2.7 酵母雙雜交分析
2.2.8 免疫共沉淀(co-IP)分析
2.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬間超表達和亞細胞定位分析
2.2.10 病毒介導(dǎo)的基因沉默(VIGS,virus induced gene silence)
2.2.11 電導(dǎo)率測定
2.2.12 DAB和臺盼藍染色
3 結(jié)果及分析
3.1 CaSGT1與CaSRC2-1互作
3.2 CaSGT1在應(yīng)對辣椒疫霉接種時的轉(zhuǎn)錄表達
3.3 在辣椒中將CaSGT1和CaSRC2-1基因共同沉默與單個基因沉默相比在抵御辣椒疫霉的免疫反應(yīng)中有很大程度上的減弱
3.4 在辣椒中瞬間共表達CaSGT1和CaSRC2-1使得細胞壞死和防御反應(yīng)增強
3.5 用VIGS和瞬間超表達相結(jié)合的方式分析CaSGT1和CaSRC2-1在辣椒免疫誘導(dǎo)中的作用
3.6 CaSGT1在應(yīng)對PcINF1/CaSRC2-1瞬間共表達時的轉(zhuǎn)錄表達
3.7 CaSGT1沉默后使得PcINF1/CaSRC2-1激發(fā)的免疫反應(yīng)減弱
3.8 CaSGT1沉默對PcINF1/CaSRC2-1互作的影響
3.9 PcINF1瞬間超表達和疫霉接種對CaSRC2-1/CaSGT1互作的影響
4 討論
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致謝
本文編號:3872361
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