前期本實驗室從辣椒疫霉cDNA文庫中分離獲得了一個elicitin家族成員PcINF1的全長cDNA,發(fā)現(xiàn)該蛋白可與辣椒SRC2-1蛋白結(jié)合,促發(fā)辣椒葉片產(chǎn)生HR(hypersensitive response)細胞壞死,并使辣椒防御反應(yīng)相關(guān)標記基因上調(diào),但是其內(nèi)在機制并不清楚。本研究在此基礎(chǔ)上進一步分析發(fā)現(xiàn)CaSGT1參與PcINF1/CaSRC2-1誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)：通過酵母雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CaSRC2-1與CaSGT1之間存在互作,并進一步通過雙分子熒光互補(BiFC)和免疫共沉淀分析(co-IP)得到證實。在辣椒植株葉片上接種疫霉,或同時瞬間表達PcINF1/CaSRC2-1可使CaSGT1的轉(zhuǎn)錄表達顯著上調(diào),病毒介導(dǎo)CaSGT1沉默(CaSGT1-VIGS)可顯著降低PcINF1/CaSRC2-1瞬間表達激活的辣椒葉片細胞HR壞死、H2O2積累、防御反應(yīng)相關(guān)標記基因轉(zhuǎn)錄表達的上調(diào),且CaSGT1和CaSRC2-1共同沉默比其中任何一個基因單獨沉默更能降低接種疫霉導(dǎo)致的HR細胞壞死和防御反應(yīng)相關(guān)基因表達。此外,還發(fā)現(xiàn)CnSGT1和cnSRC2-1沉默能降低彼此瞬間表達激活的HR反應(yīng)...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SGT1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
    1.2 C2功能域的研究與進展
    1.3 SRC2-1蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究進展
    1.4 elicitin的研究進展
    1.5 本項目研究的意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 植物材料和病原體侵染
        2.2.2 辣椒總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 實時定量PCR分析
        2.2.4 雙分子熒光互補(BiFC)分析
        2.2.5 構(gòu)建Gateway相容LUC載體和測LUC活性
        2.2.6 GUS酶活測定
        2.2.7 酵母雙雜交分析
        2.2.8 免疫共沉淀(co-IP)分析
        2.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬間超表達和亞細胞定位分析
        2.2.10 病毒介導(dǎo)的基因沉默(VIGS,virus induced gene silence)
        2.2.11 電導(dǎo)率測定
        2.2.12 DAB和臺盼藍染色
3 結(jié)果及分析
    3.1 CaSGT1與CaSRC2-1互作
    3.2 CaSGT1在應(yīng)對辣椒疫霉接種時的轉(zhuǎn)錄表達
    3.3 在辣椒中將CaSGT1和CaSRC2-1基因共同沉默與單個基因沉默相比在抵御辣椒疫霉的免疫反應(yīng)中有很大程度上的減弱
    3.4 在辣椒中瞬間共表達CaSGT1和CaSRC2-1使得細胞壞死和防御反應(yīng)增強
    3.5 用VIGS和瞬間超表達相結(jié)合的方式分析CaSGT1和CaSRC2-1在辣椒免疫誘導(dǎo)中的作用
    3.6 CaSGT1在應(yīng)對PcINF1/CaSRC2-1瞬間共表達時的轉(zhuǎn)錄表達
    3.7 CaSGT1沉默后使得PcINF1/CaSRC2-1激發(fā)的免疫反應(yīng)減弱
    3.8 CaSGT1沉默對PcINF1/CaSRC2-1互作的影響
    3.9 PcINF1瞬間超表達和疫霉接種對CaSRC2-1/CaSGT1互作的影響
4 討論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3872361