蝴蝶蘭是具有較高觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值的花卉,在國內(nèi)外花卉市場深受歡迎。盡管常規(guī)雜交育種已培育出大量蝴蝶蘭品種,但部分性狀仍需通過其它途徑進(jìn)行改良。原生質(zhì)體融合可以獲得不同種屬材料間遺傳性狀的融合,但目前該技術(shù)尚未成熟。此外,隨著蝴蝶蘭全基因組測序的完成,蝴蝶蘭重要功能基因的后續(xù)分析及轉(zhuǎn)移顯得尤為重要�；虻乃矔r表達(dá)是建立在獲得高質(zhì)量原生質(zhì)體的基礎(chǔ)上,研究基因結(jié)構(gòu)和功能的重要手段,因此在蝴蝶蘭中建立穩(wěn)定的原生質(zhì)體瞬時表達(dá)體系將使蝴蝶蘭在生物學(xué)相關(guān)領(lǐng)域研究中發(fā)揮重要作用。本研究以蝴蝶蘭無菌苗幼嫩葉片為材料,采用酶解法對蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體的分離及融合條件進(jìn)行研究,并利用PEG介導(dǎo)法將外源基因轉(zhuǎn)化到原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時表達(dá)分析。通過對影響蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體分離、融合以及基因瞬時表達(dá)的相關(guān)因素進(jìn)行了研究,初步建立了蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體分離、融合及瞬時表達(dá)體系,為進(jìn)一步開展細(xì)胞與分子生物學(xué)操作提供參考。試驗結(jié)果如下:1.蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體分離條件:以蝴蝶蘭無菌苗幼嫩葉片為材料進(jìn)行原生質(zhì)體的分離,通過正交試驗研究了纖維素酶OnozukaR-10、離析酶OnozukaR-10、甘露醇濃度與酶...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 蝴蝶蘭原生質(zhì)體研究
    2 植物原生質(zhì)體研究進(jìn)展
        2.1 植物原生質(zhì)體的分離
        2.2 植物原生質(zhì)體融合
        2.3 植物原生質(zhì)體的瞬時表達(dá)
    3 本研究的目的與意義
第二部分 試驗研究
    第一章 蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體分離條件研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體的分離與活力檢測
        3 討論
        4 結(jié)論
    第二章 蝴蝶蘭葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體融合條件研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 PEG種類對蝴蝶蘭原生質(zhì)體融合的影響
            2.2 PEG濃度對蝴蝶蘭原生質(zhì)體融合的影響
            2.3 PEG處理時間對蝴蝶蘭原生質(zhì)體融合的影響
        3 討論
        4 結(jié)論
    第三章 蝴蝶蘭原生質(zhì)體瞬時表達(dá)體系的建立
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2. 結(jié)果與分析
            2.1 PEG濃度對轉(zhuǎn)化的影響
            2.2 PEG4000處理時間對轉(zhuǎn)化的影響
            2.3 質(zhì)粒DNA含量對轉(zhuǎn)化的影響
            2.4 原生質(zhì)體的密度對轉(zhuǎn)化的影響
            2.5 瞬時表達(dá)結(jié)果
        3 討論
        4 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3871485