發(fā)布時(shí)間：2023-11-12 16:37

　　雙瓣茉莉常指的是亞熱帶植物木犀科素馨屬的雙瓣茉莉[Jasminum sambac(L.)Ait],它也是福州市的市花。雙瓣茉莉是一種天然的香料植物,其根、莖、葉均具有較高的藥用價(jià)值,能清熱解毒、活血化瘀、調(diào)經(jīng)利尿等功效;茉莉因其濃郁的清香,有窖制花茶、提煉精油、制作成鮮花餅、化妝品等的商業(yè)價(jià)值,所以在我國茶葉產(chǎn)區(qū)雙瓣茉莉的栽培面積日益擴(kuò)大。由于雙瓣茉莉只開花,罕見結(jié)實(shí),所以不能進(jìn)行有性繁殖,生產(chǎn)上常用的繁殖方式有扦插繁殖和壓條繁殖,具有成苗率高、發(fā)根快、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)。但是這種傳統(tǒng)的繁殖方式容易使得雙瓣茉莉出現(xiàn)品種退化、不能保持母本的優(yōu)良性狀等現(xiàn)象而且不利于培育新品種。另外,花色單一的雙瓣茉莉資源也制約了觀賞性狀的創(chuàng)新�，F(xiàn)代生物技術(shù)為園林觀賞植物的創(chuàng)新育種提供了高效而實(shí)用的新途徑,然而在雙瓣茉莉中的應(yīng)用研究幾乎是空白。有鑒于此,本研究針對雙瓣茉莉生物技術(shù)應(yīng)用中最基本的瓶頸,即離體再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究,為進(jìn)一步開展雙瓣茉莉優(yōu)異基因資源開發(fā)以及新品種培育等奠定基礎(chǔ)。本論文以雙瓣茉莉?yàn)椴牧?主要研究實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及研究結(jié)果如下:(1)篩選出以茉莉莖段和葉片作為外植體誘導(dǎo)愈傷組...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 雙瓣雙瓣茉莉概述
        1.1.1 雙瓣茉莉的生物學(xué)特征
        1.1.2 雙瓣茉莉的應(yīng)用價(jià)值
        1.1.3 雙瓣茉莉的繁殖
    1.2 木本植物組織培養(yǎng)再生途徑
        1.2.1 器官發(fā)生途徑的植株再生
        1.2.2 體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑
    1.3 WOX轉(zhuǎn)錄因子的研究
    1.4 植物遺傳轉(zhuǎn)化的研究
        1.4.1 遺傳轉(zhuǎn)化方法
        1.4.2 轉(zhuǎn)化受體材料的選擇
        1.4.3 農(nóng)桿菌菌株的選擇
        1.4.4 遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
    1.5 本研究的目的意義和內(nèi)容
第二章 茉莉愈傷組織誘導(dǎo)及分化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑及儀器
        2.1.3 不同外植體的消毒時(shí)間篩選
        2.1.4 愈傷組織誘導(dǎo)、繼代增殖及分化培養(yǎng)基篩選
        2.1.5 愈傷組織統(tǒng)計(jì)分析
        2.1.6 冷凍切片觀察愈傷組織的形成過程
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 不同消毒時(shí)間下雙瓣茉莉外植體的污染率
        2.2.2 不同培養(yǎng)基配方對莖段和葉片愈傷組織誘導(dǎo)率、生根率及出芽率的影響
        2.2.3 莖段和葉片愈傷組織的誘導(dǎo)
        2.2.4 冷凍切片觀察愈傷組織的形成過程
    2.3 討論
第三章 茉莉胚性愈傷組織WOX基因家族成員表達(dá)特征
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試劑及儀器
        3.1.3 總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成
        3.1.4 WOX基因表達(dá)量檢測
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 茉莉的莖段、3個(gè)月愈傷組織、5個(gè)月愈傷組織的總RNA的提取及檢測
        3.2.2 qRT-PCR引物的質(zhì)量分析
        3.2.3 WOX基因家族成員在三個(gè)時(shí)期內(nèi)的表達(dá)模式
    3.3 討論
第四章 原位雜交檢測WOX基因的表達(dá)部位
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 試劑及儀器
        4.1.3 原位雜交探針片段的擴(kuò)增
        4.1.4 原位探針的地高辛標(biāo)記
        4.1.5 原位雜交探針的純化
        4.1.6 原位雜交探針的電泳檢測
        4.1.7 原位雜交探針的點(diǎn)膜檢測
        4.1.8 原位雜交材料的處理
        4.1.9 原位雜交
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 原位雜交探針片段的擴(kuò)增
        4.2.2 原位探針的地高辛標(biāo)記
        4.2.3 原位雜交探針的點(diǎn)膜檢測
        4.2.4 JsWOX4和JsWOX1 mRNAs在脫分化細(xì)胞的檢測
    4.3 討論
第五章 茉莉PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表達(dá)載體構(gòu)建
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試劑、培養(yǎng)基、菌株
        5.1.2 儀器
        5.1.3 PCR擴(kuò)增目的基因
        5.1.4 目的片段純化回收
        5.1.5 Gateway方法構(gòu)建表達(dá)載體
        5.1.6 陽性克隆PCR驗(yàn)證
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 目的基因PCR產(chǎn)物鑒定及無膠純化回收檢測
        5.2.2 入門載體構(gòu)建
        5.2.3 PK7WG2-JsWOX4、PK7WG2-JsWOX1植物表達(dá)載體和PK7WG2-GUS對照載體構(gòu)建
    5.3 討論
第六章 茉莉愈傷組織JsWOX1/4基因轉(zhuǎn)化及檢測
    6.1 材料與方法
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 試劑
        6.1.3 菌株與植物表達(dá)載體
        6.1.4 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3103
        6.1.5 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化茉莉愈傷組織
        6.1.6 茉莉抗性愈傷組織GUS染色及GFP熒光檢測
        6.1.7 WOX基因在茉莉抗性愈傷組織中的表達(dá)水平檢測
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 攜帶質(zhì)粒農(nóng)桿菌的陽性檢測
        6.2.2 茉莉愈傷組織抗性檢測
        6.2.3 茉莉愈傷組織的轉(zhuǎn)化及其篩選
        6.2.4 愈傷組織轉(zhuǎn)化后GUS染色和GFP檢測
        6.2.5 愈傷組織過表達(dá)JsWOX1及JsWOX4對基因表達(dá)及形態(tài)的影響
    6.3 討論
第七章 總結(jié)與展望
    7.1 主要結(jié)論
    7.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3863534