植物表皮毛是植物表皮的一種附屬結(jié)構(gòu),廣泛分布于陸生植物的地上部分。表皮毛根據(jù)其構(gòu)成細(xì)胞的多少可以分為單細(xì)胞表皮毛和多細(xì)胞表皮毛,根據(jù)其有無(wú)腺體可以將其分為腺體毛和非腺體毛。表皮毛不僅可以為植物提供物理抗性還可以為植物提供化學(xué)抗性。模式植物擬南芥的表皮毛為單細(xì)胞表皮毛,其形成的分子機(jī)制已經(jīng)研究的較為清楚,然而茄科植物中多細(xì)胞表皮毛形成的分子機(jī)制尚不清楚。1、番茄種質(zhì)資源豐富。利用180份重測(cè)序的番茄核心種質(zhì)資源(包括162份表皮毛形成正常的資源和18份表皮毛缺失的資源)對(duì)調(diào)控番茄表皮毛形成的關(guān)鍵基因進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在第10號(hào)染色體的末端有一個(gè)調(diào)控表皮毛形成的關(guān)鍵因子。與此同時(shí),在50個(gè)已經(jīng)覆蓋潘那利全基因組的漸滲系(背景材料為M82)中,只有IL10-2表現(xiàn)為表皮毛缺失,而其它49個(gè)株系都與M82—樣表現(xiàn)為正常的表皮毛,說(shuō)明在第10號(hào)染色體的末端確實(shí)有一個(gè)調(diào)控表皮毛形成的關(guān)鍵因子。有趣的是,h變體LA3172的表型與IL10-2一致,也表現(xiàn)為表皮毛缺失。為了克隆這個(gè)關(guān)鍵基因,我們構(gòu)建了兩個(gè)F2分離群圖,分別為:Ailsa Craig(AC)×IL10-2和LA3172×LA...

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物表皮毛研究的意義
    1.2 單細(xì)胞表皮毛形成的研究進(jìn)展
        1.2.1 擬南芥表皮毛形成的研究進(jìn)展
        1.2.2 棉花纖維形成的研究進(jìn)展
    1.3 多細(xì)胞表皮毛形成的研究進(jìn)展
        1.3.1 番茄表皮毛形成的研究進(jìn)展
        1.3.2 其他多細(xì)胞表皮毛形成的研究進(jìn)展
    1.4 圖位克隆技術(shù)
        1.4.1 基因克隆的意義
        1.4.2 基因克隆的常用方法
        1.4.3 圖位克隆的簡(jiǎn)介
        1.4.4 圖位克隆的操作過(guò)程
        1.4.5 圖位克隆技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)和局限性
        1.4.6 圖位克隆技術(shù)在番茄基因克隆中的應(yīng)用
    1.5 C2H2鋅指蛋白的研究
    1.6 本研究的目的和意義
2 材料和方法
    2.1 番茄材料
    2.2 DNA樣品的采集
    2.3 分子標(biāo)記的獲得
    2.4 粗定位和精細(xì)定位
    2.5 表達(dá)載體的構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化
        2.5.1 自帶啟動(dòng)子表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.5.2 超量表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.5.3 干涉載體的構(gòu)建
        2.5.4 遺傳轉(zhuǎn)化
    2.6 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
        2.6.1 轉(zhuǎn)基因植株的PCR陽(yáng)性檢測(cè)
        2.6.2 轉(zhuǎn)基因植株中目標(biāo)基因的表達(dá)量檢測(cè)
    2.7 掃描電子顯微鏡
    2.8 雙突變體的構(gòu)建
        2.8.1 雙突變體的構(gòu)建
        2.8.2 雙突變體基因型的檢測(cè)
    2.9 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)
        2.9.1 酵母轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建
        2.9.2 轉(zhuǎn)化酵母AH109的基本流程
    2.10 GST-pull down
        2.10.1 載體構(gòu)建
            2.10.1.1 Wo蛋白接His標(biāo)簽載體的構(gòu)建
            2.10.1.2 H蛋白接GST標(biāo)簽載體的構(gòu)建
        2.10.2 蛋白的表達(dá)以及鑒定
3 結(jié)果與分析
    3.1 H基因的克隆
        3.1.1 番茄表皮毛形成關(guān)鍵基因的全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)
        3.1.2 遺傳群體的構(gòu)建及遺傳規(guī)律的分析
        3.1.3 分子標(biāo)記的開發(fā)
        3.1.4 H基因的精細(xì)定位
        3.1.5 H基因的候選基因
        3.1.6 ORF3多態(tài)性分析
    3.2 H候選基因的功能驗(yàn)證
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因植株的獲得和表達(dá)量檢測(cè)
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的表型觀察
    3.3 H基因主要調(diào)控I型腺毛的形成
    3.4 H基因在不同組織中的表達(dá)量分析
    3.5 H基因在茄科物種中的同源基因
        3.5.1 H基因在煙草中異位表達(dá)
        3.5.2 H基因在辣椒中的同源基因
        3.5.3 H基因在煙草和土豆等其他茄科作物中的同源基因
    3.6 H基因調(diào)控I型腺體毛形成的機(jī)理研究
        3.6.1 h對(duì)Wo具有隱性上位效應(yīng)
        3.6.2 Wo基因正調(diào)控H基因的表達(dá)
        3.6.3 H通過(guò)與Wo互作來(lái)調(diào)控I型腺體毛的形成
        3.6.4 H, Wo,CycB2三者之間的關(guān)系
    3.7 dl基因的圖位克隆
        3.7.1 LA3724的表型分析
        3.7.2 遺傳群體的構(gòu)建及dl基因遺傳規(guī)律的分析
        3.7.3 分子標(biāo)記的開發(fā)
        3.7.4 dl基因的粗定位
        3.7.5 dl基因的精細(xì)定位
        3.7.6 dl基因的候選基因
4 討論
    4.1 dl基因的候選基因
    4.2 IL10-2不能正常形成I型腺體毛
    4.3 在茄科作物中表皮毛的形成可能具有相似的調(diào)控途徑
    4.4 H基因調(diào)控番茄表皮毛形成的機(jī)理研究
參考文獻(xiàn)
附錄A
附錄B
致謝



本文編號(hào)：3846788