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烏菜花青素合成酶基因克隆及序列分析

發(fā)布時間:2023-08-04 19:36
  本課題的研究對象——烏菜產(chǎn)于我國長江流域一帶,其主要是通過原十字花科蕓薹在長期的自然選擇中變異而來,同大多數(shù)植物一樣,烏菜葉片也主要為綠色以及黃綠色,并結(jié)合不同的地理位置和氣候條件呈現(xiàn)出不同的葉色。該植物為二年生草本植物【1】。因為烏菜營養(yǎng)豐富,味道鮮美,在全國各地均有引種栽培,并形成了許多地方品種。對植物所含營養(yǎng)指標(biāo)進(jìn)行評定時,花青素含量也是一個重要指標(biāo);ㄇ嗨(Anthocyanidin)就是在各類植物中都廣泛具有的一種類黃酮化合物有機(jī)物,具有較好的溶水性。其決定植物果實和花瓣顏色;ㄇ嗨貙τ谌梭w的健康會產(chǎn)生影響作用,在發(fā)揮作用時,主要是以一種抗氧化劑的形式參與到人體的新陳代謝中,從而提高肌膚活力,促進(jìn)血液循環(huán),從而來預(yù)防氧化和動脈硬化,另外該物質(zhì)還能有效為人體提供低糖量的糖類物質(zhì),對于糖尿病患者而言,是能夠幫助自身進(jìn)行病情治療的物質(zhì)[6,7]。目前不管是醫(yī)學(xué)方面還是生物方面,對于花青素的使用與研究處于比較深入的狀態(tài),很多專家學(xué)者從醫(yī)學(xué)需要等方面出發(fā),致力于通過生物技術(shù)進(jìn)行人工花青素的合成。在合成的原料中,最為必要的是ANS反應(yīng)酶,該酶可以促進(jìn)花青素的有效合成,實現(xiàn)花色素有無顏色的...

【文章頁數(shù)】:53 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
英文縮略符
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 花青素簡介
    1.2 花青素種類
    1.3 花青素應(yīng)用及生理功能研究
        1.3.1 花青素應(yīng)用
        1.3.2 花青素生理功能研究
        1.3.3 花青素的生物合成
    1.4 花青素合成酶
        1.4.1 花青素合成酶簡介
        1.4.2 相關(guān)植物ANS研究
    1.5 烏菜研究
        1.5.1 植物學(xué)特征
        1.5.2 生物學(xué)特性
        1.5.3 類型
        1.5.4 營養(yǎng)價值
2 引言
3 RNA提取、cDNA的合成及品種篩選
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 試驗方法
    3.2 結(jié)果分析
        3.2.1 RNA電泳鑒定
        3.2.2 溶解曲線分析
        3.2.3 花青素合成酶基因相對表達(dá)量分析
4 ANS基因克隆及序列分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料與試劑
        4.1.2 試驗儀器
        4.1.3 試驗方法
    4.2 結(jié)果分析
5 正義表達(dá)載體構(gòu)建
    5.1 試驗方法
        5.1.1 目的基因片段的獲得
        5.1.2 表達(dá)載體PBI121的酶切反應(yīng)及所得片段的回收
        5.1.3 連接反應(yīng)
        5.1.4 熱激法轉(zhuǎn)化E.coli DH5a
        5.1.5 重組質(zhì)粒的篩選及菌液的保存
        5.1.6 重組質(zhì)粒的鑒定方法
    5.2 結(jié)果分析
        5.2.1 利用PCR驗證重組質(zhì)粒
        5.2.2 利用酶切進(jìn)行鑒定
6 討論
    6.1 RNA提取過程中的問題及對策
    6.2 實時熒光定量PCR實驗中的問題及對策
    6.3 PCR擴(kuò)增和連接轉(zhuǎn)化過程中的問題及對策
7 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介



本文編號:3838876

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