霜霉病是黃瓜(CucumissativusL.)栽培上最主要的卵菌病害之一,嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)。為了初步探討黃瓜蛋白酶抑制劑基因(CsPI)和過敏性誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白基因(CsHIR1)在黃瓜霜霉病抗性中的作用,本試驗以抗病種質(zhì)“PI088”和感病種質(zhì)“CCMC”為材料,在轉(zhuǎn)錄水平上對CsPI和CsHIR1在黃瓜霜霉病抗性中的表達特性進行分析;構(gòu)建植物表達載體pCAMBIA35S-CsHIR1,在優(yōu)化黃瓜再生體系的基礎(chǔ)上,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將CsHIR1初步轉(zhuǎn)入黃瓜,取得以下主要結(jié)果:1.接種霜霉菌后CsPI和CsHIR1在轉(zhuǎn)錄水平上的表達特性分析本試驗對接種霜霉菌后0h、3h、6h、12h、1d、2d、4d、7d的CCMC和PI088的葉片進行半定量分析,結(jié)果表明在接種霜霉菌4d后感病種質(zhì)CCMC的CsPI和CsHIR1的表達量顯著提高,而PI088在接種初期CsPI和CsHIR1就有較高的表達水平,12h后表達量逐漸降低,說明CsPI和CsHIR1都參與了黃瓜對霜霉菌的抗性反應(yīng)。2.再生體系的優(yōu)化本研究以CCMC的子葉節(jié)為外植體,通過比較分析發(fā)現(xiàn)苗齡為3-5d的外植體的再生率顯著高于...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 霜霉病
        1.1.1 霜霉病抗性基因定位研究進展
        1.1.2 霜霉病的抗性機制研究進展
    1.2 過敏性誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白HIR
    1.3 蛋白酶因制劑PI
    1.4 黃瓜再生的影響因素
        1.4.1 基因型
        1.4.2 外植體類型
        1.4.3 植物生長調(diào)節(jié)劑
        1.4.4 其它因素
    1.5 黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化
        1.5.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法
        1.5.2 基因槍法
        1.5.3 原生質(zhì)體法
        1.5.4 花粉管通道法
    1.6 標(biāo)記基因
    1.7 選題的目的與意義
第二章 試驗材料和方法
    2.1 植物材料、菌種和質(zhì)粒
    2.2 主要試劑和儀器設(shè)備
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 主要儀器
    2.3 抗/感種質(zhì)霜霉菌接種
        2.3.1 幼苗培養(yǎng)
        2.3.2 霜霉菌接種
        2.3.3 病情指數(shù)統(tǒng)計
    2.4 抗/感種質(zhì)接種霜霉菌后CSPI和CSHIR1的半定量分析
        2.4.1 黃瓜葉片總RNA的提取
        2.4.2 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.4.3 基因CsPI和CsHIR1的半定量
    2.5 載體構(gòu)建
        2.5.1 黃瓜葉片總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.5.2 CsHIR1克隆
        2.5.3 植物表達載體的構(gòu)建
        2.5.4 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        2.5.5 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.5.6 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
    2.6 黃瓜再生體系的優(yōu)化
        2.6.1 準(zhǔn)備工作
        2.6.2 種子生根培養(yǎng)
        2.6.3 外植體的篩選
        2.6.4 外植體的再生培養(yǎng)
        2.6.5 再生芽的生根培養(yǎng)
        2.6.6 再生植株的馴化移栽
        2.6.7 再生率統(tǒng)計
    2.7 黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.7.1 農(nóng)桿菌的活化培養(yǎng)
        2.7.2 農(nóng)桿菌侵染和共培養(yǎng)
        2.7.3 轉(zhuǎn)化植株的移栽和授粉
        2.7.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.8 轉(zhuǎn)化植株的鑒定
        2.8.1 植物總DNA的CTAB提取方法
        2.8.2 T0代轉(zhuǎn)化植株P(guān)CR檢測
        2.8.3 T1代轉(zhuǎn)化植株檢測和實時熒光定量分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 霜霉菌接種后抗/感種質(zhì)CSHIR1和CSPI在轉(zhuǎn)錄水平上的表達分析
        3.1.1 霜霉菌接種后抗/感種質(zhì)的病情指數(shù)統(tǒng)計
        3.1.2 黃瓜總RNA的檢測
        3.1.3 CsHIR1和CsPI半定量分析
    3.2 黃瓜再生培養(yǎng)體系的優(yōu)化
        3.2.1 不同的子葉節(jié)對再生頻率的影響
        3.2.2 黃瓜再生過程
    3.3 CSHIR1對黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化初步分析
        3.3.1 CsHIR1克隆
        3.3.2 黃瓜CsHIR1表達載體的構(gòu)建
        3.3.3 CsHIR1對黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.4 黃瓜CSHIR1轉(zhuǎn)基因植株的檢測
        3.4.1 T0代轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測和數(shù)據(jù)分析
        3.4.2 T1代轉(zhuǎn)基因植株的檢測和數(shù)據(jù)分析
第四章 討論和結(jié)論
    4.1 討論
    4.2 結(jié)論
        4.2.1 接種霜霉菌后CsPI和CsHIR1在轉(zhuǎn)錄水平上的特性分析
        4.2.2 構(gòu)建表達載體pCAMBIA35S-CsHIR1
        4.2.3 黃瓜再生體系的優(yōu)化
        4.2.4 黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化
參考文獻
縮略詞
附錄
致謝
作者簡介



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