辣椒白絹病是由一種真菌病原菌Sclerotium rolfsli sacc引起的土壤微生物疾病,辣椒感染白絹病損失巨大。生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)木霉屬Trichoderma spp.真菌能夠通過一系列復(fù)雜的重寄生方式抑制其生長,所以運(yùn)用木霉屬制成的真菌制劑作為一種持續(xù)有效生態(tài)環(huán)保的白絹病防治方法已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。早期我們從醴陵辣椒白絹病感病災(zāi)區(qū)的土壤中分離鑒定了能拮抗白絹病致病菌的23株木霉,并對(duì)搜集到的木霉通過ITS(Internal Transcribed Spacer)序列檢測(cè)分類,之后檢測(cè)了其中13株木霉菌Trichoderma spp對(duì)致病菌S. rolfsii的抑制效果,發(fā)現(xiàn)了不同株間抑菌效果的差異,其中效果最強(qiáng)的是13號(hào)木霉,經(jīng)分類13號(hào)木霉為(Trichoderma hamatum)鉤狀木霉(Th13)。將該木霉為材料,另挑選了5株抑菌率有差異的鉤狀木霉作對(duì)照,開展了抗病相關(guān)酶及基因的相關(guān)分子生物學(xué)研究。對(duì)其三種主要的細(xì)胞壁降解酶：幾丁質(zhì)酶、堿性蛋白酶和p-1,3-葡聚糖酶進(jìn)行誘導(dǎo)產(chǎn)酶,對(duì)該三種酶的酶產(chǎn)生量和酶學(xué)活性進(jìn)行了檢測(cè)分析。通過SPSS statics19軟件對(duì)抑菌率...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 辣椒白絹病病原菌背景
        1.1.1 病原菌的形態(tài)特征
        1.1.2 寄主和癥狀表現(xiàn)
        1.1.3 生長環(huán)境
        1.1.4 白絹病的分布和防治
        1.1.5 主要的防治方法
    1.2 鉤狀木霉的研究背景
        1.2.0 木霉屬的概況
        1.2.1 木霉屬的生物防治機(jī)制
        1.2.2 木霉的重寄生作用和生防基因
    1.3 研究的意義
    1.4 研究的技術(shù)路線
第二章 鉤狀木霉中重要酶活的測(cè)定與分析
    2.1 材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基的配置
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑配制
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 方法
        2.2.1 鉤狀木霉和致病菌活化和培養(yǎng)
        2.2.2 制備白絹病致病菌細(xì)胞壁
        2.2.3 制備誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)酶活表達(dá)
        2.2.4 DNS法測(cè)量樣本中幾丁質(zhì)酶、β-1,3葡聚糖酶酶活力
        2.2.5 Folin酚試劑法檢測(cè)堿性蛋白酶的酶活力
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.3.2 幾丁質(zhì)酶、β-1,3-葡聚糖酶和堿性蛋白酶酶活力測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)和趨勢(shì)分析
        2.3.3 SPSS數(shù)據(jù)分析軟件分析各組酶活數(shù)據(jù)和抑菌率關(guān)系顯著性
    2.4 討論
第三章 chit42和prb1基因的編碼序列的克隆和chit42表達(dá)量分析
    3.1 材料
        3.1.1 研究使用的菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 SDS法提取Th13總DNA
        3.2.2 Trizol法提取Th13中總mRNA
        3.2.3 引物設(shè)計(jì)
        3.2.4 PCR擴(kuò)增Th13幾丁質(zhì)酶chit42和堿性蛋白酶prb1的CDS片段
        3.2.5 Th13幾丁質(zhì)酶chit42和堿性蛋白酶prb1的cDNA片段擴(kuò)增
        3.2.6 PCR產(chǎn)物切膠回收
        3.2.7 基因片段比對(duì)及其編碼氨基酸序列生物信息學(xué)分析
        3.2.8 Trizol法提取鉤狀木霉中的RNA合成cDNA第一鏈
        3.2.9 RT-PCR半定量檢測(cè)鉤狀木霉中chit42基因表達(dá)量
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Th13總mRNA提取瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果
        3.3.2 PCR和RT-PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測(cè)
        3.3.3 擴(kuò)增得到的DNA序列BLAST在線比對(duì)分析
        3.3.4 cDNA和DNA克隆序列比對(duì)分析
        3.3.5 氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.3.6 氨基酸保守區(qū)結(jié)構(gòu)域分析
        3.3.7 蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.3.8 RT-PCR反應(yīng)的條件
        3.3.9 半定量PCR檢測(cè)誘導(dǎo)幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量電泳檢測(cè)
    3.4 討論
第四章 上游調(diào)控序列克隆和比對(duì)分析
    4.1 材料
        4.1.1 菌種
        4.1.2 培養(yǎng)基的配置
        4.1.3 試劑
    4.2 方法
        4.2.1 染色體步移技術(shù)延伸克隆chit42基因上游序列
        4.2.2 Genome walking反應(yīng)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        4.2.3 目的片段回收純化、測(cè)序和拼接
        4.2.4 拼接片段序列用在線軟件對(duì)調(diào)控元件進(jìn)行分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)條帶
        4.3.2 拼接片段在線序列比對(duì)
        4.3.3 上游調(diào)控序列的分析
    4.4 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



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