自交不親和性(self-incompatibility,SI)是植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的一種特殊生殖機(jī)制,它能夠促進(jìn)異花授粉抑制自花授粉從而保持高度雜合性,是植物遺傳變異的重要保證。蕓薹屬植物自交不親和性在遺傳上受單基因S位點(diǎn)(S-locus)上的復(fù)等位基因控制,花粉雄性決定因子SCR(S-locus cysteine-rich protein)與柱頭雌性決定因子SRK(S-locus protein kinase)發(fā)生特異性識(shí)別,將胞外信號(hào)傳遞至SRK胞內(nèi)激酶域,使得SRK激酶域解除THLI/THL2的抑制作用而發(fā)生磷酸化,進(jìn)而引發(fā)ARC1(arm repeat containing 1)的磷酸化和細(xì)胞質(zhì)定位,活化的ARC1與胞質(zhì)內(nèi)靶蛋白Exo70A1結(jié)合,在泛素激活酶E1與泛素結(jié)合酶E2的共同協(xié)助下,Exo70A1經(jīng)26S“泛素化—蛋白酶體途徑”發(fā)生降解,最終導(dǎo)致自花花粉的萌發(fā)受阻或花粉管的生長(zhǎng)受到抑制。本研究利用酵母雙雜交系統(tǒng)及GST pull-down技術(shù)研究甘藍(lán)自交不親和反應(yīng)中臂重復(fù)蛋白ARC1與Exo70A1間的相互作用。對(duì)11種甘藍(lán)材料的ARC1及Exo70A1基因進(jìn)行...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蕓薹屬植物自交不親和性研究進(jìn)展
        1.1.1 蕓薹屬植物孢子體自交不親和反應(yīng)信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究進(jìn)展
        1.1.2 ARC1的結(jié)構(gòu)及功能研究進(jìn)展
        1.1.3 Exo70A1的結(jié)構(gòu)及功能研究進(jìn)展
    1.2 基于重疊延伸PCR的定點(diǎn)突變技術(shù)
        1.2.1 重疊延伸PCR技術(shù)原理
        1.2.2 重疊延伸PCR在定點(diǎn)突變中的應(yīng)用
    1.3 酵母雙雜交技術(shù)
        1.3.1 酵母雙雜交系統(tǒng)原理
        1.3.2 酵母雙雜交系統(tǒng)在蛋白質(zhì)相互作用研究中的應(yīng)用
    1.4 GST pull-down技術(shù)
        1.4.1 GST pull-down技術(shù)原理
        1.4.2 GST pull-down技術(shù)在蛋白質(zhì)相互作用研究中的應(yīng)用
第二章 引言
    2.1 研究背景及目的意義
    2.2 技術(shù)路線
第三章 材料及方法
    3.1 材料
    3.2 ARC1及Exo70A1編碼基因的克隆及序列分析
        3.2.1 ARC1及Exo70A1編碼基因的PCR擴(kuò)增
        3.2.2 ARC1及Exo70A1編碼基因的TA克隆
    3.3 ARC1及Exo70A1序列的短截及突變
        3.3.1 ARC1序列的短截及突變
        3.3.2 Exo70A1序列的短截
    3.4 ARC1和Exo70A1相互作用的酵母雙雜交技術(shù)檢測(cè)
        3.4.1 酵母重組載體的構(gòu)建
        3.4.2 重組質(zhì)粒的毒性及自激活檢測(cè)
        3.4.3 酵母雙雜交檢測(cè)ARC1和Exo70A1的相互作用
    3.5 ARC1和Exo70A1相互作用的GST pull-down技術(shù)體外檢測(cè)
        3.5.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 融合蛋白的體外表達(dá)及純化
        3.5.3 GST pull-down鑒定ARC1與Exo70A1的相互作用
    3.6 ARC1-Exo70A1互作模體編碼序列的聚類分析
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 基因的克隆及序列分析
        4.1.1 11種甘藍(lán)材料ARC1及Exo70A1基因的擴(kuò)增
        4.1.2 ARC1及Exo70A1基因的序列分析
    4.2 特異性引物PCR所產(chǎn)生的縮短和突變的變異體群
        4.2.1 ARC1序列的短截及突變
        4.2.2 Exo70A1序列的短截
    4.3 ARC1-Exo70A1相互作用的酵母雙雜交檢測(cè)分析
        4.3.1 酵母載體的構(gòu)建與分析
        4.3.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母的毒性及其自激活鑒定
        4.3.3 ARC1-Exo70A1的酵母雙雜交相互作用檢測(cè)
    4.4 ARC1-Exo70A1相互作用的GST pull-down體外驗(yàn)證
        4.4.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建與分析
        4.4.2 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        4.4.3 GST pull-down驗(yàn)證ARC1-Exo70A1相互作用
    4.5 ARC1-Exo70A1互作模體的確定及分析
        4.5.1 ARC1-Exo70A1相互作用模體的確定
        4.5.2 ARC1-Exo70A1互作區(qū)段編碼序列的聚類分析
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
在讀期間參與的科研項(xiàng)目及獲獎(jiǎng)



本文編號(hào)：3785621