菠蘿蜜在我國已經(jīng)有上千年的種植歷史,其中以海南島最多。海南島全島零散分布著大量遺傳多樣性豐富的實(shí)生種質(zhì)資源,其中蘊(yùn)含著豐富的優(yōu)良性狀資源,具有很高的開發(fā)利用價(jià)值。迄今為止,尚沒有系統(tǒng)的對(duì)海南島菠蘿蜜種質(zhì)資源親緣關(guān)系的研究報(bào)導(dǎo)。本研究對(duì)全海南島菠蘿蜜進(jìn)行隨機(jī)采樣,選用SRAP和SCoT兩個(gè)分子標(biāo)記,通過葉片總DNA提取、PCR反應(yīng)體系優(yōu)化,對(duì)156份海南島菠蘿蜜種質(zhì)、8個(gè)國外種質(zhì)、3個(gè)榴蓮蜜種質(zhì)和1個(gè)面包果種質(zhì)的基因組遺傳相似性進(jìn)行研究,為今后定向培育以及新品種的選育、種質(zhì)開發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料,研究結(jié)果如下:(1)通過比較研究,使用含有4% β-巰基乙醇和12.5 mmol/L硼砂的2% CTAB提取緩沖液,兩次抽提后用1/2體積無水乙醇和與上清等體積的4 mol/L LiCl沉淀去除大部分RNA,能夠提取到較高質(zhì)量的基因組DNA。(2)利用L25(56)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到菠蘿蜜SCoT-PCR反應(yīng)體系(20μL):Mg2+ 2mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、Taq DNA 聚合酶 1U、引物 0.375mol/L、模板DNA10ng,最適退火溫度48.2℃。(3)應(yīng)用篩選...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 菠蘿蜜研究概述
        1.1.1 菠蘿蜜概述
        1.1.2 菠蘿蜜繁殖方式研究
        1.1.3 我國菠蘿蜜種質(zhì)資源調(diào)查研究
    1.2 遺傳多樣性研究概述
        1.2.1 遺傳多樣性
        1.2.2 遺傳多樣性檢測(cè)方法
        1.2.3 SRAP
        1.2.4 SCoT
    1.3 菠蘿蜜遺傳多樣性研究
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 菠蘿蜜種質(zhì)樣本采集
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菠蘿蜜基因組DNA提取
        2.2.2 基因組DNA純度和得率檢測(cè)
        2.2.3 擴(kuò)增反應(yīng)體系優(yōu)化
        2.2.4 退火溫度的確定
        2.2.5 引物的篩選
        2.2.6 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)
        2.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 不同方法提取的菠蘿蜜基因組DNA質(zhì)量比較
    3.2 SCoT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系優(yōu)化結(jié)果
    3.3 退火溫度的優(yōu)化結(jié)果
    3.4 引物篩選結(jié)果
        3.4.1 SRAP引物組合篩選結(jié)果
        3.4.2 SCoT引物篩選結(jié)果
    3.5 SRAP分子標(biāo)記擴(kuò)增結(jié)果
        3.5.1 SRAP引物擴(kuò)增結(jié)果
        3.5.2 基于SRAP分子標(biāo)記的菠蘿蜜遺傳多樣性
    3.6 SCoT分子標(biāo)記擴(kuò)增結(jié)果
        3.6.1 SCoT引物擴(kuò)增結(jié)果
        3.6.2 基于SCoT分子標(biāo)記的菠蘿蜜遺傳多樣性
    3.7 種質(zhì)間親緣關(guān)系綜合分析
4 討論
    4.1 菠蘿蜜基因組DNA提取方法探討
    4.2 SCoT-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化與擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)
    4.3 不同分子標(biāo)記對(duì)菠蘿蜜遺傳多樣性比較分析
    4.4 海南島菠蘿蜜種質(zhì)資源遺傳多樣性
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3783553