光敏色素B激活標(biāo)簽的抑制蛋白1基因(phyB activation-tagged suppressor1 gene,BAS1)是油菜素內(nèi)酯失活基因,其主要編碼一個(gè)細(xì)胞色素P450,油菜素內(nèi)酯失活基因過(guò)量表達(dá)會(huì)導(dǎo)致油菜素內(nèi)酯碳26位羥基羥化,并且使本身的生物活性遠(yuǎn)低于正常油菜素內(nèi)酯。該基因?qū)χ参矬w內(nèi)活性油菜素內(nèi)酯含量方面起著重要作用。很多花卉植物的花葉都會(huì)受到衰老的影響,而油菜素類是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑,調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)具有重要的作用。該研究以煙草?三星‘和矮牽牛?夢(mèng)幻曲系列‘品種為材料,利用了衰老特異性啟動(dòng)子SAG12融合了BAS1基因,用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將衰老特異啟動(dòng)子SAG12驅(qū)動(dòng)BAS1基因在植物衰老時(shí)表達(dá),延緩植物的衰老。為改善觀賞植物的品質(zhì)或創(chuàng)造新種質(zhì)資源提供了一條新途徑。取得以下研究結(jié)果:1.構(gòu)建SAG12-BAS1植物表達(dá)載體及遺傳轉(zhuǎn)化煙草和矮牽牛本研究以pSH737為最初載體,克隆構(gòu)建了SAG12啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)BAS1基因表達(dá)元件、Kan+為篩選標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體pSH737-SAG12-BAS1。酶切及PCR驗(yàn)證后將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404,采用葉盤遺傳轉(zhuǎn)化方...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 植物激素與衰老的研究
        1.1 植物衰老概念與衰老類型
        1.2 植物衰老的誘導(dǎo)
        1.3 葉片衰老的分子基礎(chǔ)
            1.3.1 葉片衰老相關(guān)基因的分類
            1.3.2 葉片衰老相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控
    2 矮牽牛研究概況
    3 油菜素內(nèi)酯的研究進(jìn)展
        3.1 油菜素內(nèi)酯合成和代謝途徑
        3.2 油菜素內(nèi)酯合成途徑
        3.3 油菜素內(nèi)酯代謝途徑
        3.4 油菜素內(nèi)酯的生理功能
            3.4.1 細(xì)胞伸長(zhǎng)與分裂
            3.4.2 促進(jìn)光合作用
            3.4.3 調(diào)節(jié)衰老
            3.4.4 逆境響應(yīng)
        3.5 油菜素內(nèi)酯與其它植物激素之間的相互作用
            3.5.1 油菜素內(nèi)酯與生長(zhǎng)素之間的關(guān)系
            3.5.2 油菜素內(nèi)酯與赤霉素之間的關(guān)系
            3.5.3 油菜素內(nèi)酯與細(xì)胞分裂素之間的關(guān)系
            3.5.4 油菜素內(nèi)酯與脫落酸之間的關(guān)系
            3.5.5 油菜素內(nèi)酯與乙烯之間的關(guān)系
    4 花卉分子育種研究進(jìn)展及存在的問(wèn)題
    5 研究目的和意義
第二章 轉(zhuǎn)SAG12-BAS1基因煙草植株的獲得
    1 材料與方法
        1.1 材料供試
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
            1.2.1 主要試劑
            1.2.2 主要儀器
        1.3 主要溶液的配制
            1.3.1 主要試劑的配制
            1.3.2 主要培養(yǎng)基的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.3 大腸桿菌的DNA轉(zhuǎn)化
        2.4 質(zhì)粒DNA提取
        2.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.6 農(nóng)桿菌的DNA轉(zhuǎn)化
        2.7 農(nóng)桿菌菌液PCR鑒定
        2.8 菌種保存
        2.9 遺傳轉(zhuǎn)化
            2.9.1 農(nóng)桿菌活化與培養(yǎng)
            2.9.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化
            2.9.3 抗性芽篩選和生根
            2.9.4 煙草的煉苗與移栽
        2.10 轉(zhuǎn)基因植株GUS組織化學(xué)染色
        2.11 煙草植株DNA提取
        2.12 煙草基因組DNA的PCR
        2.13 生長(zhǎng)觀察試驗(yàn)
        2.14 轉(zhuǎn)基因煙草葉綠素含量測(cè)定和保護(hù)性酶活性的測(cè)定
            2.14.1 葉綠素含量測(cè)定
            2.14.2 煙草中SOD酶活和MDA含量的測(cè)定
        2.15 植物激素含量測(cè)定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 植物表達(dá)載體的獲得
        3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因植株獲得
        3.3 植物表型及葉片衰老分析
        3.4 轉(zhuǎn)基因煙草理化指標(biāo)測(cè)定和葉片衰老進(jìn)程
        3.5 煙草植株中細(xì)胞分裂素含量的測(cè)定
    4 討論
第三章轉(zhuǎn) 基因矮牽牛的獲得
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑，儀器，主要溶液的配制(參考第三章：實(shí)驗(yàn)材料)
    2 實(shí)驗(yàn)方法 (參考第三章：實(shí)驗(yàn)方法)
        2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2 抗性芽篩選和生根
        2.3 矮牽牛的煉苗與移栽
        2.4 轉(zhuǎn)基因植株GUS組織化學(xué)染色(參考第三章：煙草組織化學(xué)染色)
        2.5 矮牽牛植株DNA提取
        2.6 矮牽�；蚪MDNA的PCR鑒定
        2.7 葉片的離體培養(yǎng)及花朵壽命的檢測(cè)
        2.8 葉綠素含量測(cè)定及可溶性糖測(cè)定
        2.9 SOD、POD和CAT酶活性測(cè)定及MDA含量測(cè)定：
        2.10 矮牽牛衰老相關(guān)基因表達(dá)分析
            2.10.1 矮牽牛葉及花中提取總RNA
            2.10.2 cDNA第一鏈合成
            2.10.3 Real time-PCR反應(yīng)
    3 結(jié)果分析
        3.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因植株獲得
        3.2 矮牽牛植物表型及葉片衰老分析
        3.3 轉(zhuǎn)基因矮牽牛理化指標(biāo)測(cè)定和葉片衰老進(jìn)程
        3.4 轉(zhuǎn)BAS1基因?qū)χ参锼ダ舷嚓P(guān)基因表達(dá)的影響
    4 討論
第四章 結(jié)論、創(chuàng)新與展望
    1 研究結(jié)論
        (1)轉(zhuǎn)基因煙草
        (2)轉(zhuǎn)基因矮牽牛
    2 研究創(chuàng)新
    3 研究展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞
附錄
    1.碩士期間發(fā)表研究論文
    2.碩士期間參加會(huì)議
    3.碩士期間參加課題
致謝



本文編號(hào)：3781396