百合灰霉病[Botrytis elliptica(Berk.)Cooke]俗稱百合葉枯病,是嚴(yán)重影響百合生長發(fā)育的一種真菌性病害。橢圓灰葡萄孢(Botrytis cinerea)為百合灰霉病的病原菌,能夠在中溫高濕環(huán)境下迅速萌發(fā)并傳播,嚴(yán)重阻礙百合集中規(guī)模化生產(chǎn),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。百合受到灰葡萄孢侵染后,多種生理指標(biāo)發(fā)生變化。絲裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是植物免疫系統(tǒng)的基本組成部分,與植物抵御抗真菌性病害密切相關(guān)。本試驗以亞洲百合‘精粹’為試驗材料,選擇最佳分化、繼代條件,建立離體快繁體系；測定該品種百合試管苗在灰霉病病原菌脅迫下發(fā)生的生理響應(yīng)；并通過灰葡萄孢侵染,克隆得到一個與抗灰霉病有關(guān)的MAPK基因,同時對該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。研究的結(jié)果如下：(1)在亞洲百合‘精粹’離體快繁體系建立試驗中,誘導(dǎo)鱗片分化的最適培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；鱗片不定芽繼代增殖培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；促無菌苗生根結(jié)鱗莖最適培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖60...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 百合離體快繁技術(shù)研究
        1.1.1 外植體選擇對百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.2 培養(yǎng)基與激素對百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.3 培養(yǎng)條件對百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.4 其他方面對百合組織培養(yǎng)的影響
    1.2 植物與病原菌互作中生理生化特性的影響
        1.2.1 植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)與植物抗病的關(guān)系
        1.2.2 植物保護(hù)酶系統(tǒng)與植物抗病的關(guān)系
        1.2.3 病害脅迫對植物細(xì)胞膜系統(tǒng)的影響
    1.3 百合灰霉病研究進(jìn)展
    1.4 MAPK在植物抗病中的防衛(wèi)作用
        1.4.1 MAPK信號級聯(lián)系統(tǒng)
        1.4.2 植物體MAPK的分類
        1.4.3 植物中MAPKs功能
    1.5 本課題研究的目的及意義
第二章 亞洲百合“精粹”離體再生快繁體系的建立
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗儀器及用具
        2.1.3 試驗藥品準(zhǔn)備
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 試驗方法
        2.2.1 設(shè)計方案
        2.2.2 滅菌
        2.2.3 外植體滅菌時間對建立無菌系的影響
        2.2.4 不同接種部位對再生小鱗莖的影響
        2.2.5 鱗莖放置方向?qū)υ偕△[莖繁殖的影響
        2.2.6 最適分化培養(yǎng)基的篩選
        2.2.7 最適繼代培養(yǎng)基的篩選
        2.2.8 最適生根培養(yǎng)基的篩選
        2.2.9 移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 外植體滅菌時間對建立無菌系的影響
        2.3.2 不同接種部位對再生小鱗莖的影響結(jié)果
        2.3.3 鱗莖放置方向?qū)υ偕△[莖繁殖的影響結(jié)果
        2.3.4 最適分化培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.5 最適繼代培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.6 最適生根培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.7 移栽試驗結(jié)果
    2.4 討論
第三章 橢圓灰葡萄孢脅迫下亞洲百合的生理響應(yīng)
    3.1 試驗材料
        3.1.1 供試材料
        3.1.2 試驗儀器及用具
        3.1.3 試驗藥品準(zhǔn)備
        3.1.4 PDA培養(yǎng)基
    3.2 試驗方法
        3.2.1 橢圓灰葡萄孢(灰霉病菌)培養(yǎng)
        3.2.2 橢圓灰葡萄孢侵染供試材料
        3.2.3 丙二醛(MDA)含量測定
        3.2.4 過氧化物歧化酶(SOD)含量測定
        3.2.5 過氧化物酶(POD)含量測定
        3.2.6 多酚氧化酶(PPO)含量測定
        3.2.7 苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量測定
        3.2.8 可溶性蛋白含量測定
        3.2.9 可溶性糖含量測定
    3.3 試驗結(jié)果
        3.3.1 丙二醛(MDA)含量變化
        3.3.2 過氧化物歧化酶(SOD)活性變化
        3.3.3 過氧化物酶(POD)活性
        3.3.4 多酚氧化酶(PPO)含量
        3.3.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性變化
        3.3.6 可溶性蛋白含量
        3.3.7 可溶性糖含量
    3.4 討論
        3.4.1 灰霉病對亞洲百合“精粹”試管苗質(zhì)膜系統(tǒng)的影響
        3.4.2 灰霉病對亞洲百合“精粹”試管苗滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)的影響
        3.4.3 灰霉病對亞洲百合“精粹”試管苗酶保護(hù)系統(tǒng)的影響
第四章 亞洲百合抗灰霉MAPK基因克隆及序列分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 供試材料
        4.1.2 試驗儀器
        4.1.3 試驗藥品
        4.1.4 生物學(xué)軟件
    4.2 試驗準(zhǔn)備
        4.2.1 前期準(zhǔn)備及常用溶液配制
        4.2.2 試驗中引物設(shè)計
    4.3 試驗方法
        4.3.1 總RNA提取
        4.3.2 反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA
        4.3.3 MAPK基因保守區(qū)擴(kuò)增
        4.3.4 MAPK基因3’端序列擴(kuò)增及測序
        4.3.5 MAPK基因5’端序列擴(kuò)增及測序
        4.3.6 MAPK基因全長的擴(kuò)增及測序
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 總RNA提取
        4.4.2 MAPK中間保守區(qū)克隆
        4.4.3 MAPK3’RACE克隆
        4.4.4 MAPK5'RACE克隆
        4.4.5 MAPK全長克隆
        4.4.6 MAPK生物信息學(xué)分析
        4.4.7 MAPK蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測
    4.5 討論
第五章 全文總結(jié)
    5.1 亞洲百合“精粹”離體再生快繁體系的建立
    5.2 橢圓灰葡萄孢脅迫下亞洲百合的生理響應(yīng)
    5.3 亞洲百合MAPK基因克隆
    5.4 本試驗后續(xù)研究
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝



本文編號：3756598