發(fā)布時(shí)間：2023-03-05 17:09

　　百合灰霉病[Botrytis elliptica(Berk.)Cooke]俗稱百合葉枯病,是嚴(yán)重影響百合生長(zhǎng)發(fā)育的一種真菌性病害。橢圓灰葡萄孢(Botrytis cinerea)為百合灰霉病的病原菌,能夠在中溫高濕環(huán)境下迅速萌發(fā)并傳播,嚴(yán)重阻礙百合集中規(guī)模化生產(chǎn),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。百合受到灰葡萄孢侵染后,多種生理指標(biāo)發(fā)生變化。絲裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是植物免疫系統(tǒng)的基本組成部分,與植物抵御抗真菌性病害密切相關(guān)。本試驗(yàn)以亞洲百合‘精粹’為試驗(yàn)材料,選擇最佳分化、繼代條件,建立離體快繁體系；測(cè)定該品種百合試管苗在灰霉病病原菌脅迫下發(fā)生的生理響應(yīng)；并通過灰葡萄孢侵染,克隆得到一個(gè)與抗灰霉病有關(guān)的MAPK基因,同時(shí)對(duì)該基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。研究的結(jié)果如下：(1)在亞洲百合‘精粹’離體快繁體系建立試驗(yàn)中,誘導(dǎo)鱗片分化的最適培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；鱗片不定芽繼代增殖培養(yǎng)最適培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L；促無菌苗生根結(jié)鱗莖最適培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖60...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 百合離體快繁技術(shù)研究
        1.1.1 外植體選擇對(duì)百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.2 培養(yǎng)基與激素對(duì)百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.3 培養(yǎng)條件對(duì)百合組織培養(yǎng)的影響
        1.1.4 其他方面對(duì)百合組織培養(yǎng)的影響
    1.2 植物與病原菌互作中生理生化特性的影響
        1.2.1 植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)與植物抗病的關(guān)系
        1.2.2 植物保護(hù)酶系統(tǒng)與植物抗病的關(guān)系
        1.2.3 病害脅迫對(duì)植物細(xì)胞膜系統(tǒng)的影響
    1.3 百合灰霉病研究進(jìn)展
    1.4 MAPK在植物抗病中的防衛(wèi)作用
        1.4.1 MAPK信號(hào)級(jí)聯(lián)系統(tǒng)
        1.4.2 植物體MAPK的分類
        1.4.3 植物中MAPKs功能
    1.5 本課題研究的目的及意義
第二章 亞洲百合“精粹”離體再生快繁體系的建立
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)儀器及用具
        2.1.3 試驗(yàn)藥品準(zhǔn)備
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 設(shè)計(jì)方案
        2.2.2 滅菌
        2.2.3 外植體滅菌時(shí)間對(duì)建立無菌系的影響
        2.2.4 不同接種部位對(duì)再生小鱗莖的影響
        2.2.5 鱗莖放置方向?qū)υ偕△[莖繁殖的影響
        2.2.6 最適分化培養(yǎng)基的篩選
        2.2.7 最適繼代培養(yǎng)基的篩選
        2.2.8 最適生根培養(yǎng)基的篩選
        2.2.9 移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 外植體滅菌時(shí)間對(duì)建立無菌系的影響
        2.3.2 不同接種部位對(duì)再生小鱗莖的影響結(jié)果
        2.3.3 鱗莖放置方向?qū)υ偕△[莖繁殖的影響結(jié)果
        2.3.4 最適分化培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.5 最適繼代培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.6 最適生根培養(yǎng)基的篩選結(jié)果
        2.3.7 移栽試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第三章 橢圓灰葡萄孢脅迫下亞洲百合的生理響應(yīng)
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 供試材料
        3.1.2 試驗(yàn)儀器及用具
        3.1.3 試驗(yàn)藥品準(zhǔn)備
        3.1.4 PDA培養(yǎng)基
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 橢圓灰葡萄孢(灰霉病菌)培養(yǎng)
        3.2.2 橢圓灰葡萄孢侵染供試材料
        3.2.3 丙二醛(MDA)含量測(cè)定
        3.2.4 過氧化物歧化酶(SOD)含量測(cè)定
        3.2.5 過氧化物酶(POD)含量測(cè)定
        3.2.6 多酚氧化酶(PPO)含量測(cè)定
        3.2.7 苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量測(cè)定
        3.2.8 可溶性蛋白含量測(cè)定
        3.2.9 可溶性糖含量測(cè)定
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 丙二醛(MDA)含量變化
        3.3.2 過氧化物歧化酶(SOD)活性變化
        3.3.3 過氧化物酶(POD)活性
        3.3.4 多酚氧化酶(PPO)含量
        3.3.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性變化
        3.3.6 可溶性蛋白含量
        3.3.7 可溶性糖含量
    3.4 討論
        3.4.1 灰霉病對(duì)亞洲百合“精粹”試管苗質(zhì)膜系統(tǒng)的影響
        3.4.2 灰霉病對(duì)亞洲百合“精粹”試管苗滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)的影響
        3.4.3 灰霉病對(duì)亞洲百合“精粹”試管苗酶保護(hù)系統(tǒng)的影響
第四章 亞洲百合抗灰霉MAPK基因克隆及序列分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 供試材料
        4.1.2 試驗(yàn)儀器
        4.1.3 試驗(yàn)藥品
        4.1.4 生物學(xué)軟件
    4.2 試驗(yàn)準(zhǔn)備
        4.2.1 前期準(zhǔn)備及常用溶液配制
        4.2.2 試驗(yàn)中引物設(shè)計(jì)
    4.3 試驗(yàn)方法
        4.3.1 總RNA提取
        4.3.2 反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA
        4.3.3 MAPK基因保守區(qū)擴(kuò)增
        4.3.4 MAPK基因3’端序列擴(kuò)增及測(cè)序
        4.3.5 MAPK基因5’端序列擴(kuò)增及測(cè)序
        4.3.6 MAPK基因全長(zhǎng)的擴(kuò)增及測(cè)序
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 總RNA提取
        4.4.2 MAPK中間保守區(qū)克隆
        4.4.3 MAPK3’RACE克隆
        4.4.4 MAPK5'RACE克隆
        4.4.5 MAPK全長(zhǎng)克隆
        4.4.6 MAPK生物信息學(xué)分析
        4.4.7 MAPK蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    4.5 討論
第五章 全文總結(jié)
    5.1 亞洲百合“精粹”離體再生快繁體系的建立
    5.2 橢圓灰葡萄孢脅迫下亞洲百合的生理響應(yīng)
    5.3 亞洲百合MAPK基因克隆
    5.4 本試驗(yàn)后續(xù)研究
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝



本文編號(hào)：3756598