蓮藕(Nelumbo nucifera Gaertn.)是睡蓮科蓮屬多年生水生草本植物,是我國種植面積最大的水生蔬菜。蓮藕產(chǎn)品主要有鮮藕、藕粉和蓮籽,均含有豐富的淀粉、蛋白質(zhì)、多種維生素以及礦質(zhì)營養(yǎng),具有很好的營養(yǎng)保健功能,深受國內(nèi)外廣大消費者的喜愛。鈣依賴蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinase,CDPK)是生長發(fā)育和逆境誘發(fā)的鈣信號的重要信號傳遞體,具有調(diào)控植物理化代謝、調(diào)控信號轉(zhuǎn)導途徑中下游基因的表達、調(diào)控離子和水分跨膜運輸?shù)壬飳W作用。本文研究了Ca2+對鹽脅迫下蓮藕相關生理指標的影響,克隆得到蓮藕CDPK家族基因,研究分析了其表達特征和功能,成功構(gòu)建NnCDPK13表達載體。1、研究了鹽(NaCl)脅迫下蓮藕對外源鈣離子(Ca(N03)2)的生理響應。鹽脅迫后,蓮藕葉片葉綠素、可溶性蛋白含量和SOD活性顯著降低,細胞膜透性、丙二醛和脯氨酸含量升高；加入Ca2+后葉綠素、可溶性蛋白含量和SOD活性均顯著提高,脯氨酸含量大幅度升高,葉片細胞膜透性和丙二醛含量顯著降低；說明Ca2+對鹽脅迫下蓮藕的生長具有較好的改善作用。2、采用RACE-PCR技術...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 鹽脅迫對植物的危害及植物的耐鹽機理
        1.1 鹽脅迫對植物的危害
        1.2 植物耐鹽的生理機制
    2 植物耐鹽相關基因的研究
        2.1 植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)合成酶基因
        2.2 植物氧脅迫相關基因
        2.3 植物離子轉(zhuǎn)運相關基因
        2.4 編碼轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)基因
        2.5 DNA解旋酶基因
        2.6 感應和傳導脅迫信號的蛋白激酶基因
    3 鈣調(diào)節(jié)鹽脅迫下植物生長的研究進展
        3.1 促進種子萌發(fā)和植株生長
        3.2 維持細胞膜的穩(wěn)定性
        3.3 改善植物的光合作用
        3.4 促進離子的選擇性吸收和區(qū)域化分布
        3.5 維持滲透平衡
        3.6 減少活性氧生成
        3.7 鈣與脅迫信號轉(zhuǎn)導
    4 鈣依賴蛋白激酶(CDPK)的研究進展
        4.1 CDPK的結(jié)構(gòu)特點
        4.2 CDPK的調(diào)控機制
        4.3 CDPK在植物內(nèi)的分布及表達
        4.4 CDPK的功能研究
    5 本研究的目的意義
第二章 鹽脅迫下蓮藕對外源Ca²⁺的生理響應
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片葉綠素含量的影響
        2.2 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片質(zhì)膜透性的影響
        2.3 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片可溶性蛋白含量的影響
        2.4 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片SOD活性的影響
        2.5 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片丙二醛含量的影響
        2.6 外源Ca²⁺對鹽脅迫下蓮藕葉片脯氨酸含量的影響
    3 討論
第三章 NnCDPKs cDNA克隆及序列分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 幼葉總RNA提取及完整性檢測
        2.2 NnCDPKs cDNA克隆及序列分析
    3 討論
第四章 NnCDPKs的表達分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 樣品RNA的完整性檢測
        2.2 NnCDPKs的表達分析
    3 討論
第五章 NnCDPK13載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 NnCDPK13 cDNA全長擴增
        2.2 NnCDPK13 cDNA序列分析
        2.3 目的片段及表達載體質(zhì)粒的雙酶切
        2.4 重組質(zhì)粒的PCR鑒定及酶切驗證
        2.5 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌后檢測鑒定
        2.6 農(nóng)桿菌介導擬南芥及轉(zhuǎn)基因種子篩選
    3 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文



本文編號：3747451