歐芹（Petroselinum crispum L.）,又名洋芫荽和法國香菜等,屬于傘形科歐芹屬一二年生草本植物。作為香辛蔬菜,食用嫩葉,鮮根、莖汁可供藥用。非生物脅迫,包括溫度（高溫、低溫）、鹽害和干旱等,是導致歐芹減產的重要因素之一。分離歐芹相關的抗性基因,篩選與抗性性狀緊密連鎖的分子標記,對于歐芹抗逆品種的選育有重要的意義。qRT-PCR是定量基因轉錄水平的主要方法之一,需要使用內參基因（Reference gene）校正目標基因的表達量。本實驗克隆了歐芹相關內參基因的部分片段,使用qRT-PCR技術建立每個基因相對應實時熒光定量的方法,研究了不同逆境條件下內參基因表達的穩(wěn)定性。同時,為進一步驗證在本研究中確定的內參基因,還對pcDREB1基因在歐芹高溫脅迫下的表達譜進行了研究。具體研究結果如下:（1）以歐芹葉片cDNA為模板,篩選了 8條內參基因（GAPDH、ACTIN、eIF-4α、SAND、UBC、TIP41、EF-1α和TUB）的中間片段。與其他物種的同源基因進行BLAST比對,結果顯示堿基相似度均在80%以上。（2）利用qRT-PCR技術建立了上述8條基因相對應的實時定... 

【文章頁數】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
引言
第一章 文獻綜述
    1.1 實時定量PCR介紹
        1.1.1 實時定量PCR研究進展
        1.1.2 實時定量PCR的一般應用
        1.1.3 實時熒光定量PCR的使用標準
    1.2 常用內參基因及其應用
    1.3 植物與非生物脅迫
    1.4 植物激素與脅迫
    1.5 基因穩(wěn)定性分析軟件
        1.5.1 geNorm
        1.5.2 NormFinder
        1.5.3 BestKeeper
    1.6 歐芹內參基因篩選研究目的意義及技術路線
        1.6.1 本研究目的及意義
        1.6.2 本研究的技術路線
第二章 歐芹相關內參基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 實驗方法
    2.2 數據處理及分析
        2.2.1 歐芹葉片cDNA合成及候選基因的克隆
        2.2.2 候選內參基因的序列比對
        2.2.3 歐芹候選內參基因特異引物設計及特異性檢測
    2.3 討論
第三章 歐芹相關內參基因在不同脅迫下表達穩(wěn)定性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 實驗方法
    3.2 結果與分析
        3.2.1 融解曲線結果分析
        3.2.2 標準曲線
        3.2.3 歐芹候選內參基因Cq值分析
        3.2.4 內參基因在不同實驗條件下的表達變化
        3.2.5 內參基因的表達穩(wěn)定性評價
    3.3 歐芹候選內參基因的驗證
    3.4 討論
        3.4.1 評價歐芹內參基因表達的重要性
        3.4.2 內參基因表達穩(wěn)定性評價
總結與展望
創(chuàng)新之處
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3729347