葡萄（Vitis vinifera L.）是世界性普遍栽種的經(jīng)濟(jì)果樹之一,尤其在人們證實(shí)葡萄漿果中的白藜蘆醇為各類水果之首及白藜蘆醇在防治心血管疾病及預(yù)防癌癥方面的重要醫(yī)療保健作用后,更加促進(jìn)了市場對葡萄及相關(guān)產(chǎn)品的消費(fèi)。國際市場上,無核葡萄已成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展及育種研究的熱點(diǎn)方向。目前存在的突出問題是無核品種單一,特別缺乏優(yōu)質(zhì)大粒、紅色無核葡萄新品種。因此,挖掘葡萄無核基因并進(jìn)行其功能分析,對于通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育無核葡萄新品種、創(chuàng)建無核葡萄新種質(zhì),具有重要的理論和育種實(shí)踐意義。本文以課題組前期有核,無核葡萄雜交后代胚珠發(fā)育關(guān)鍵時期的轉(zhuǎn)錄組為依據(jù),并結(jié)合葡萄基因組數(shù)據(jù),開展了YABBY基因家族生物信息學(xué)分析,篩選并克隆差異表達(dá)顯著的VvYABBY4,并進(jìn)行了初步的功能分析。獲得以下研究結(jié)果:1.通過葡萄全基因組,鑒定出7個YABBY基因,并依據(jù)進(jìn)化樹以及前人的研究,又將其分成5個亞族,同一亞族的基因擁有相似的蛋白和內(nèi)含子外顯子結(jié)構(gòu)。根據(jù)YABBY基因在有核無核品種中胚珠發(fā)育時期的表達(dá)分析來看,VvYABBY4在胚珠敗育的關(guān)鍵時期表達(dá)差異更為明顯,表明其在無核葡萄形成過程中起到不可或缺的作用,... 

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物種子發(fā)育形成及研究進(jìn)展
    1.2 國內(nèi)外無核葡萄研究進(jìn)展
    1.3 YABBY家族轉(zhuǎn)錄因子及其功能概述
    1.4 本研究的目的和意義
第二章 葡萄YABBY基因家族的鑒定和表達(dá)分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 主要設(shè)備儀器
        2.1.3 試驗(yàn)試劑
        2.1.4 引物
    2.2 方法
        2.2.1 葡萄YABBY家族基因的鑒定
        2.2.2 多物種YABBY家族基因進(jìn)化樹的構(gòu)建
        2.2.3 葡萄YABBY家族基因內(nèi)含子外顯子及其結(jié)構(gòu)域的分析
        2.2.4 葡萄YABBY家族轉(zhuǎn)錄因子的同線性分析
        2.2.5 葡萄YABBY轉(zhuǎn)錄因子在不同器官的定量表達(dá)。
        2.2.6 葡萄YABBY轉(zhuǎn)錄因子在不同葡萄品種胚珠發(fā)育過程的表達(dá)分析
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 葡萄YABBY家族基因的鑒定與分析
        2.3.2 葡萄YABBY家族基因結(jié)構(gòu)特征分析
        2.3.3 葡萄YABBY基因家族結(jié)構(gòu)域分析
        2.3.4 多物種YABBY家族基因進(jìn)化關(guān)系分析
        2.3.5 葡萄YABBY家族基因染色體定位及同線性分析
        2.3.6 葡萄YABBY轉(zhuǎn)錄因子在有核和無核葡萄品種中不同器官的表達(dá)分析
        2.3.7 葡萄YABBY轉(zhuǎn)錄因子在不同葡萄品種中胚珠發(fā)育過程的表達(dá)分析
    2.4 討論
第三章 葡萄VvYABBY4的克隆及功能研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 主要設(shè)備儀器
        3.1.3 試劑材料
        3.1.4 引物
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 RNA的制備與反轉(zhuǎn)錄
        3.2.2 葡萄VvYABBY4基因的擴(kuò)增和序列分析
        3.2.3 VvYABBY4基因的過表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.4 農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)的番茄遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.5 轉(zhuǎn)基因番茄的鑒定
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因番茄的表型觀察及組織石蠟切片觀察
        3.2.7 花粉活力及花粉萌發(fā)力的測定
        3.2.8 花粉粒的顯微觀察
        3.2.9 參與番茄果實(shí)及種子發(fā)育相關(guān)的基因表達(dá)分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 VvYABBY4基因的克隆和序列分析
        3.3.2 VvYABBY4基因過表達(dá)載體構(gòu)建及介導(dǎo)番茄的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.3.3 VvYABBY4轉(zhuǎn)基因番茄的鑒定
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因番茄整體植株觀察及葉片差異分析
        3.3.5 轉(zhuǎn)基因番茄花序的觀察與分析
        3.3.6 花粉活力和萌發(fā)力的測定及花粉粒掃描電鏡的觀察
        3.3.7 轉(zhuǎn)基因株系成熟果實(shí)表型觀察
        3.3.8 轉(zhuǎn)基因株系種子表型觀察及統(tǒng)計分析
        3.3.9 VvYABBY4轉(zhuǎn)基因番茄中種子發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)分析
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]玉米YABBY基因家族的全基因組鑒定與分析[J]. 葛敏,呂遠(yuǎn)大,張體付,李坦,張曉林,趙涵.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(06)
[2]小麥YABBY基因的生物信息學(xué)分析[J]. 趙偉,宿紅艷,王磊.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2009(07)
[3]GSDS:基因結(jié)構(gòu)顯示系統(tǒng)[J]. 郭安源,朱其慧,陳新,羅靜初.  遺傳. 2007(08)
[4]無核白葡萄的無核果形成的組織形態(tài)學(xué)研究[J]. 王近衛(wèi),堀內(nèi)昭作,林伯年,沈德緒.  園藝學(xué)報. 1992(01)

博士論文
[1]基于轉(zhuǎn)錄組和基因組的葡萄無核分子機(jī)制及無核相關(guān)基因功能研究[D]. 王莉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[2]番茄景天庚酮糖-1，7-二磷酸酯酶基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 王美玲.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]葡萄無核品種及其雜種胚敗育機(jī)理與胚挽救技術(shù)研究[D]. 王飛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2002



本文編號：3701241