辣椒是山東省主要種植蔬菜之一。近年來,隨著辣椒種植面積的增加,辣椒病毒病的危害日益嚴(yán)重,多呈現(xiàn)復(fù)合性侵染,嚴(yán)重影響辣椒的生產(chǎn),已成為制約山東省辣椒產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素。本研究以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ),對山東省10個辣椒種植區(qū)域進(jìn)行15種病毒病病原的檢測與鑒定,基本摸清山東省各辣椒產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況以及主次關(guān)系,以及病毒復(fù)合侵染情況,同時對辣椒脈黃化病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）山東分離物進(jìn)行全基因組序列的克隆與分析,并結(jié)合不同地區(qū)的PeVYV分離物,對PeVYV進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。主要結(jié)論如下:1.利用15種病毒特異性引物檢測253份辣椒樣品,檢測到14種病毒病原,病原種類有:PMMo V、CMV、TMGMV、BBWV、BWYV、TMV、ToMV、TYLCV、PVY、MABYV、CABYV、PeVYV、AMV和ChiVMV,CaCV未檢測到。國內(nèi)首次報道的辣椒病毒病原為BWYV、MABYV、CABYV和PeVYV。2.253份樣品病毒檢出率達(dá)96.0%,在所檢出的辣椒病毒病病原中,PMMo V與CMV的檢出率最高,分別為61.6%、60.0%,是危害... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要 Abstract 1 前言
1.1 辣椒病毒病病原種類及危害簡介
    1.1.1 馬鈴薯卷葉病毒屬
    
1.1.1.1 辣椒脈黃化病毒
    
1.1.1.2 甜菜西方黃化病毒
    
1.1.1.3 葫蘆蚜傳黃化病毒
    1.1.2 煙草輕型綠花葉病毒
    1.1.3 蠶豆萎蔫病毒
    1.1.4 番茄黃化曲葉病毒
1.2 辣椒病毒病的防治措施
1.3 辣椒病毒病的檢測技術(shù)研究概況
    1.3.1 生物學(xué)檢測法
    1.3.2 血清學(xué)方法
    1.3.3 分子生物學(xué)方法
1.4 本研究的目的與意義 2 材料與方法
2.1 實驗材料與儀器
    2.1.1 病毒樣品的采集
    2.1.2 實驗試劑
    2.1.3 實驗所需儀器
    2.1.4 實驗試劑的配制方法
2.2 辣椒病毒病中RNA病毒的檢測鑒定
    2.2.1 樣品RNA提取
    2.2.2 相關(guān)引物設(shè)計
    2.2.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
    2.2.4 PCR擴(kuò)增
    2.2.5 PCR產(chǎn)物的克隆和測序
    
2.2.5.1 瓊脂糖凝膠電泳及DNA片段回收
    
2.2.5.2 連接載體
    
2.2.5.3 大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞的制備
    
2.2.5.4 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α
    
2.2.5.5 提取質(zhì)粒DNA
    
2.2.5.6 重組克隆質(zhì)粒的PCR鑒定
    2.2.6 序列分析
2.3 辣椒病毒病中雙生病毒的檢測與鑒定
    2.3.1 樣品DNA提取
    2.3.2 引物的合成
    2.3.3 雙生病毒的RCR擴(kuò)增
    2.3.4 PCR產(chǎn)物的克隆及測序
    2.3.5 序列分析
2.4 辣椒脈黃化病毒全基因組的PCR擴(kuò)增
    2.4.1 樣品RNA提取
    2.4.2 引物的設(shè)計與合成
    2.4.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
    2.4.4 全基因組PCR擴(kuò)增
    2.4.5 PCR產(chǎn)物的克隆及測序
    2.4.6 序列分析 3 結(jié)果與分析
3.1 山東省侵染辣椒的RNA病毒病病原檢測結(jié)果
    3.1.1 山東省侵染辣椒的RNA病毒種類檢測結(jié)果
    3.1.2 山東省侵染辣椒的RNA病毒病檢出率
    3.1.3 山東省各地辣椒病毒病分布情況
3.2 山東省侵染辣椒的雙生病毒檢測結(jié)果
3.3 山東省辣椒病毒病復(fù)合侵染情況
3.4 辣椒脈黃化病毒山東分離物（PeVYV-SD）全基因組擴(kuò)增及序列分析
    3.4.1 辣椒脈黃化病毒山東分離物全長擴(kuò)增
    3.4.2 辣椒脈黃化病毒山東分離物基因組結(jié)構(gòu)分析
    3.4.3 辣椒脈黃化病毒部分基因序列進(jìn)化樹分析 4 討論
4.1 山東省侵染辣椒的病毒病病原鑒定
4.2 辣椒病毒病復(fù)合侵染
4.3 辣椒脈黃化病毒全基因序列分析 5 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文



本文編號：3694936