水通道蛋白（aquaporins,AQPs）作為植物中重要的膜通道蛋白,在膜上形成運(yùn)輸水的孔道,調(diào)節(jié)細(xì)胞膜兩側(cè)水分的進(jìn)出。質(zhì)膜內(nèi)在蛋白（plasma membrane intrinsic proteins,PIPs）作為水通道蛋白的一個(gè)亞家族,是典型的高效水分選擇性通道蛋白,在維持植物體內(nèi)的水分平衡中發(fā)揮重要作用。本論文以蘋果‘秦冠’（Malus domestica.cv.Qinguan）為試材,克隆獲得Md PIP1;1和Md PIP1;2基因全長序列,明確其定位于細(xì)胞質(zhì)膜上;比較了二者在蘋果根和葉中的表達(dá)差異;通過遺傳轉(zhuǎn)化獲得Md PIP1;1和Md PIP1;2過表達(dá)轉(zhuǎn)基因‘王林’蘋果愈傷和轉(zhuǎn)基因擬南芥株系,進(jìn)一步分析了Md PIP1;1和Md PIP1;2基因在植株抵御干旱脅迫和鹽脅迫中的功能。主要結(jié)果如下:1.蘋果質(zhì)膜內(nèi)在蛋白基因Md PIP1;1和Md PIP1;2編碼區(qū)全長序列均為870 bp,編碼289個(gè)氨基酸。通過亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)表明,Md PIP1;1和Md PIP1;2蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)膜。對(duì)Mh PIP1;1和Mh PIP1;2基因在根和葉中的表達(dá)分析表明,Mh P... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蘋果中干旱脅迫相關(guān)基因的研究進(jìn)展
    1.2 蘋果中鹽脅迫相關(guān)基因的研究進(jìn)展
    1.3 植物中水通道蛋白的研究進(jìn)展
        1.3.1 植物中水通道蛋白的分類
        1.3.2 植物中水通道蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 植物中水通道蛋白的研究進(jìn)展
    1.4 植物中質(zhì)膜內(nèi)在蛋白的研究進(jìn)展
        1.4.1 植物質(zhì)膜內(nèi)在蛋白的功能
        1.4.2 蘋果質(zhì)膜內(nèi)在蛋白的研究
    1.5 研究目的意義及技術(shù)路線
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 引物
        2.1.4 植物材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 蘋果葉片總RNA提取
        2.2.2 cDNA的第一鏈的合成
        2.2.3 基因的克隆與測序
        2.2.4 Real-time PCR
        2.2.5 Md PIP1;1和Md PIP1;2 亞細(xì)胞定位
        2.2.6 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.7 ‘王林’蘋果愈傷和擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.8 轉(zhuǎn)基因植株分子鑒定
            2.2.8.1 轉(zhuǎn)基因株系DNA水平鑒定
            2.2.8.2 轉(zhuǎn)基因株系RNA水平鑒定
        2.2.9 葉片MDA含量的測定
        2.2.10 抗氧化酶活測定
        2.2.11 葉片相對(duì)電導(dǎo)率的測定
        2.2.12 數(shù)據(jù)處理
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 蘋果質(zhì)膜內(nèi)在蛋白基因Md PIP1;1和Md PIP1;2 的克隆與表達(dá)分析
        3.1.1 Mh PIP1;1和Mh PIP1;2 在根和葉中的表達(dá)分析
        3.1.2 Md PIP1;1和Md PIP1;2 的克隆
        3.1.3 Md PIP1;1和Md PIP1;2 的亞細(xì)胞定位
    3.2 過表達(dá)MdPIP1;1轉(zhuǎn)基因植物材料的耐旱性及耐鹽性分析
        3.2.1 擬南芥和‘王林’蘋果愈傷轉(zhuǎn)基因株系鑒定
        3.2.2 MdPIP1;1轉(zhuǎn)基因‘王林’蘋果愈傷耐鹽性分析
        3.2.3 MdPIP1;1轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)干旱脅迫和鹽脅迫的響應(yīng)
    3.3 過表達(dá)MdPIP1;2轉(zhuǎn)基因植物材料的耐旱性及耐鹽性分析
        3.3.1 擬南芥和‘王林’蘋果愈傷轉(zhuǎn)基因株系鑒定
        3.3.2 MdPIP1;2轉(zhuǎn)基因‘王林’蘋果愈傷增強(qiáng)鹽脅迫下的耐受性
        3.3.3 MdPIP1;2轉(zhuǎn)基因擬南芥提高干旱和鹽脅迫下的耐受性
第四章 討論
    4.1 水通道蛋白組織特異性表達(dá)對(duì)其功能的影響
    4.2 不同PIPs成員在逆境脅迫下的獨(dú)特功能
第五章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3675068