植物總是會受到非生物和生物脅迫的傷害,脅迫環(huán)境不利于它們的生長發(fā)育。抗壞血酸是植物體內(nèi)重要的抗氧化劑,通過清除逆境產(chǎn)生的過量ROS,在植物抵抗逆境所造成的損害中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。抗壞血酸對人體也有著非常重要的作用,且人體自身不能合成抗壞血酸,只能通過含抗壞血酸含量高的水果蔬菜獲取。目前,對主要的模式作物如擬南芥、番茄等,研究人員對于抗壞血酸的合成代謝研究已經(jīng)取得很大進展,抗壞血酸在高等植物中的合成途徑已經(jīng)基本確定,但是關(guān)于調(diào)控因子影響植物抗壞血酸含量方面進展較少。前人報道擬南芥中AMR1調(diào)控因子對葉片抗壞血酸合成有負調(diào)控作用,但調(diào)控機制尚不明確。本文根據(jù)擬南芥中抗壞血酸調(diào)控因子AtAMR1的番茄同源基因SlAMR1,研究其對番茄漿果中抗壞血酸合成代謝的調(diào)控機制,具有一定的科學(xué)意義和重要的應(yīng)用價值。AMR1最早是在擬南芥中發(fā)現(xiàn)的第一個抗壞血酸調(diào)控因子,特異地在D-Man/L-Gal途徑中發(fā)揮著重要作用。本實驗是擬南芥中AMR1為信息探針,在番茄Unigene數(shù)據(jù)庫中搜索同源性最高且具有相同保守結(jié)構(gòu)域的Unigene命名為SlAMR1。在番茄中對SlAMR1做轉(zhuǎn)基因功能驗證,并從生理生... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 課題的提出
    1.2 植物抗壞血酸的研究進展
        1.2.1 抗壞血酸的生理功能
        1.2.2 抗壞血酸在植物中的生物合成途徑
        1.2.3 植物體內(nèi)抗壞血酸的氧化
        1.2.4 植物體內(nèi)抗壞血酸的循環(huán)再生
        1.2.5 抗壞血酸的轉(zhuǎn)運
        1.2.6 植物體內(nèi)抗壞血酸合成的調(diào)控
    1.3 F-box蛋白研究進展
        1.3.1 F-box蛋白與泛素蛋白酶體途徑
        1.3.2 F-box在植物生長發(fā)育過程中的作用
2 材料與方法
    2.1 植物材料
    2.2 主要試劑、菌株及載體
    2.3 實驗方法
        2.3.1 番茄抗壞血酸含量測定分析
        2.3.2 轉(zhuǎn)基因材料氧化處理
        2.3.3 葉綠素含量測定
        2.3.4 丙二醛(MDA)含量測定
        2.3.5 DAB染色
        2.3.6 番茄葉片H2O2熒光染色鑒定
        2.3.7 抗壞血酸合成途徑底物飼喂處理番茄葉片
        2.3.8 抗壞血酸合成途徑底物飼喂處理番茄果實
        2.3.9 GMP酶活測量
        2.3.10 GalUR酶活測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 F-box蛋白家族的系統(tǒng)進化分析
    3.2 F-box蛋白SlAMR1轉(zhuǎn)基因材料葉片抗壞血酸含量分析
    3.3 SlAMR1轉(zhuǎn)基因材料果實中抗壞血酸含量及基因表達量分析
    3.4 SlAMR1轉(zhuǎn)基因材料對光周期的響應(yīng)
    3.5 轉(zhuǎn)基因材料的氧化脅迫反應(yīng)
    3.6 轉(zhuǎn)基因材料活性氧水平鑒定
    3.7 AsA合成途徑底物飼喂處理轉(zhuǎn)基因材料葉片
    3.8 AsA合成途徑底物飼喂處理轉(zhuǎn)基因材料果實
    3.9 葉片中GMP酶活測定
    3.10 葉片中GalUR酶活測定
    3.11 泛素蛋白的Western檢測
    3.12 SlAMR1互作基因表達量測定
4 討論與展望
    4.1 討論
    4.2 后續(xù)工作展望
參考文獻
附錄
    附錄一 DNA提取
    附錄二 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
    附錄三 實時熒光定量PCR分析
    附錄四 Western Blot
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]EMS誘變的‘里格爾87-5’番茄M2群體突變體表型及其抗壞血酸研究[J]. 劉根忠,王云飛,孟祥飛,張余洋,葉志彪.  園藝學(xué)報. 2017(01)
[2]番茄抗壞血酸合成代謝研究進展[J]. 張鳳霞,陶佩文,李漢霞,葉志彪,張余洋.  中國蔬菜. 2016(01)
[3]Reduction of methylviologen-mediated oxidative stress tolerance in antisense transgenic tobacco seedlings through restricted expression of StAPX[J]. Wei-hong SUN,Yong WANG,Hua-gang HE,Xue LI,Wan SONG,Bin DU,Qing-wei MENG.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2013(07)

博士論文
[1]番茄Dof基因家族全基因組分析及SlDof22、SlDHAR1和FaGalUR在AsA積累中的功能分析[D]. 蔡曉鋒.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]番茄抗壞血酸生物合成酶GME和MIOX的功能分析[D]. 劉軍霞.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3657106