有機酸是果實風味品質(zhì)重要組成之一,柑橘果實的有機酸主要為檸檬酸。本文以普通椪柑和早熟椪柑果實（C. reticulata Blanco cv. Ponkan）為材料,分析了質(zhì)子泵（V-ATPase）在柑橘果實檸檬酸代謝中的功能,獲得了檸檬酸代謝相關的V-ATPase不同亞基編碼基因。研究發(fā)現(xiàn)了轉錄因子CitERF13通過與質(zhì)子泵CitVHA-c4發(fā)生蛋白互作,參與了檸檬酸積累。主要結果如下：1.利用柑橘基因組數(shù)據(jù)庫,分離得到了18個V-ATPase編碼基因（命名為CitVHA）,其中CitVHA-A2、CitVHA-F1、CitVHA-F2、CitVHA-G1、CitVHA-al與CitVHA-c4的表達模式與椪柑果實發(fā)育過程檸檬酸積累呈正相關關系；利用高橙（高酸）和溫州蜜柑（低酸）果實,進一步驗證了CitVHA-F1、CitVHA-F2和CitVHA-c4與檸檬酸積累的相關性；相反,CitVHA-E1、CitVHA-c2、CitVHA-c3、 CitVHA-c"、CitVHA-d和CitVHA-e可能與椪柑果實發(fā)育過程檸檬酸降解有關,利用熱處理椪柑果實促使降酸,驗證了CitVHA-E... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 柑橘果實有機酸種類
    1.2 柑橘果實有機酸變化規(guī)律
    1.3 柑橘果實檸檬酸合成與降解
    1.4 柑橘果實檸檬酸轉運
        1.4.1 轉運蛋白
        1.4.2 質(zhì)子泵
            1.4.2.1 質(zhì)子泵簡介
            1.4.2.2 質(zhì)子泵與果實有機酸
    1.5 轉錄因子與果實品質(zhì)
    1.6 轉錄因子與果實風味
    1.7 研究目標和內(nèi)容
2 V-ATPase與柑橘果實檸檬酸代謝
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要品質(zhì)指標測定
            2.1.2.1 可滴定酸(TA)測定
            2.1.2.2 有機酸測定
        2.1.3 基因表達分析
            2.1.3.1 RNA提取和cDNA合成
            2.1.3.2 實時定量PCR(qRT-PCR)分析
        2.1.4 統(tǒng)計分析
    2.2 結果與分析
        2.2.1 椪柑果實發(fā)育階段過程有機酸和可滴定酸(TA)含量變化
        2.2.2 椪柑果實發(fā)育階段過程V-ATPase編碼基因表達研究
        2.2.3 利用不同酸度柑橘驗證檸檬酸積累相關的CitVHA基因
        2.2.4 利用熱處理降酸椪柑驗證檸檬酸降解相關的CitVHA基因
    2.3 討論
3 參與檸檬酸代謝的CitERF13鑒別及其功能研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 基因表達分析
            3.1.2.1 基因獲得
            3.1.2.2 RNA提取和逆轉錄
            3.1.2.3 實時定量PCR(qRT-PCR)分析
        3.1.3 酵母雙雜交(蛋白互作)
        3.1.4 亞細胞定位
        3.1.5 雙分子熒光互補(蛋白互作)
        3.1.6 統(tǒng)計分析
    3.2 結果與分析
        3.2.1 酵母雙雜結果顯示CitVHA-c4與CitERF13存在蛋白-蛋白互作
        3.2.2 明確CitERF13和CitVHA-c4的同源基因也具有互作效應
        3.2.3 CitVHA-c4與CitERF13亞細胞定位分析
        3.2.4 BiFC驗證CitVHA-c4與CitERF13蛋白互作
        3.2.5 CitVHA-c4與CitERF13協(xié)同表達模式研究
    3.3 討論
4 CitERF13與CitVHA-c4協(xié)同調(diào)控檸檬酸代謝的生物學機制
    4.1 材料和方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 煙草瞬時過量表達
        4.1.3 擬南芥瞬時過量表達
        4.1.4 煙草轉基因
        4.1.5 檸檬酸測定
        4.1.6 統(tǒng)計分析
    4.2 結果與分析
        4.2.1 利用CitERF13過量表達的轉基因煙草研究基因功能
        4.2.2 CitERF13和CitVHA-c4與檸檬酸積累功能研究
        4.2.3 利用擬南芥突變體研究CitERF13和CitVHA-c4的協(xié)同關系
    4.3 討論
5 小結與展望
    5.1 小結
    5.2 展望
參考文獻
作者學習經(jīng)歷及在學期間所取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3647511