甜菜堿是植物體內(nèi)合成的重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì),研究表明,甜菜堿不僅能夠在逆境脅迫的情況下提高植物的抗逆性,而且還能在正常條件下促進植物生長。甜菜堿醛脫氫酶BADH和膽堿氧化酶COD是與甜菜堿合成有關(guān)的兩種關(guān)鍵酶。甜菜堿作為一種重要的保護物質(zhì),參與植物對許多環(huán)境脅迫的響應(yīng)。早期研究表明,轉(zhuǎn)cod A番茄能夠合成甜菜堿,在沒有脅迫的正常條件下對種子萌發(fā)和幼苗生長均無負(fù)面影響,不僅如此,還會在生殖階段促進花序的生長和種子的產(chǎn)生,在花和果實發(fā)育中作用尤為明顯,增加了花和果實的大小。因此探究不同甜菜堿合成途徑關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)基因番茄的果實發(fā)育過程及甜菜堿對果實發(fā)育的影響機理具有重要意義。本研究以野生型番茄、轉(zhuǎn)cod A番茄和轉(zhuǎn)BADH的番茄為材料,探究甜菜堿對番茄果實發(fā)育的影響,主要結(jié)果如下:（1）在正常條件下,轉(zhuǎn)cod A和轉(zhuǎn)BADH番茄較WT番茄植株具有更大的花和果實。（2）在幼苗和開花坐果期,轉(zhuǎn)cod A和轉(zhuǎn)BADH番茄比WT番茄具有更高的葉片凈光合速率（Pn）以及葉綠素含量。轉(zhuǎn)基因和野生型番茄的葉片的光化學(xué)效率無顯著差異。（3）與WT番茄相比,轉(zhuǎn)cod A和轉(zhuǎn)BADH番茄葉片中具有較高的蔗糖磷酸合... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 甜菜堿
        1.1.1 甜菜堿概述
        1.1.2 甜菜堿功能
        1.1.3 甜菜堿合成途徑
        1.1.4 甜菜堿的轉(zhuǎn)基因研究
    1.2 番茄果實的發(fā)育
        1.2.1 番茄果實
        1.2.2 番茄果實發(fā)育過程
        1.2.3 番茄果實細胞的發(fā)育
        1.2.4 番茄果實細胞發(fā)育的基因調(diào)控
    1.3 光合作用對果實發(fā)育的影響
        1.3.1 光合速率與產(chǎn)量的關(guān)系
        1.3.2 光合產(chǎn)物的運輸和分配
        1.3.3 葉綠素含量與光合作用
    1.4 蔗糖磷酸合成酶
        1.4.1 植物蔗糖代謝
        1.4.2 蔗糖磷酸合成酶
    1.5 植物激素與果實的生長和發(fā)育
        1.5.1 生長素
        1.5.2 細胞分裂素
        1.5.3 油菜素甾醇
    1.6 高通量轉(zhuǎn)錄組測序
        1.6.1 高通量轉(zhuǎn)錄組測序概念
        1.6.2 高通量轉(zhuǎn)錄組測序的基本原理
        1.6.3 高通量轉(zhuǎn)錄組測序流程
        1.6.4 高通量轉(zhuǎn)錄組測序的發(fā)展應(yīng)用
    1.7 本研究的意義
2 材料與方法
    2.1 材料的選擇與處理
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗材料的培養(yǎng)與處理
        2.1.3 PCR引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 提取番茄基因組DNA
        2.2.2 PCR篩選
        2.2.3 總RNA的提取
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄獲得c DNA第一條鏈
        2.2.5 實時定量PCR
        2.2.6 甜菜堿含量的測定
        2.2.7 激光共聚焦顯微鏡觀測
        2.2.8 光合速率的測定
        2.2.9 葉綠素?zé)晒鈪?shù)的測定
        2.2.10 葉綠素含量測定
        2.2.11 可溶性糖和淀粉含量的測定
        2.2.12 可溶性蛋白含量的測定
        2.2.13 蔗糖磷酸合成酶SPS活性的測定
        2.2.14 激素含量的測定
        2.2.15 轉(zhuǎn)基因番茄轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.16 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 轉(zhuǎn)基因番茄植株的PCR檢測
    3.2 BADH蛋白分析
    3.3 轉(zhuǎn)BADH和轉(zhuǎn)codA基因番茄葉片中甜菜堿含量
    3.4 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄花和果實表型的比較
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄花的表型
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實的表型
        3.4.3 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄花和果實的表型統(tǒng)計分析
        3.4.4 轉(zhuǎn)cod A番茄與WT番茄花的子房觀察
    3.5 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片光合特性的比較
        3.5.1 轉(zhuǎn)基因番茄和野生型番茄在幼苗時期葉光合參數(shù)的變化
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因番茄和野生型番茄在開花坐果期葉片光合參數(shù)的變化
        3.5.3 轉(zhuǎn)基因番茄和野生型番茄在幼苗時期和開花坐果時期Pn的比較
        3.5.4 轉(zhuǎn)基因番茄和野生型番茄葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化
    3.6 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片葉綠素含量
    3.7 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片蔗糖磷酸合成酶活性及可溶性糖和淀粉含量的變化
        3.7.1 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片蔗糖磷酸合成酶活性
        3.7.2 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片可溶性糖含量
        3.7.3 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片淀粉含量
    3.8 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實可溶性糖和淀粉含量的變化
        3.8.1 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實可溶性糖含量
        3.8.2 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實淀粉含量
    3.9 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄葉片和果實可溶性蛋白含量測定
    3.10 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實激素等相關(guān)基因表達分析
    3.11 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實中激素含量
    3.12 轉(zhuǎn)基因番茄與野生型番茄果實高通量轉(zhuǎn)錄組測序分析
        3.12.1 差異基因表達分析
        3.12.2 差異表達基因GO分類
        3.12.3 差異表達基因KEGG注釋
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3644185