草莓磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因PHO1的分離及功能分析
發(fā)布時(shí)間:2022-02-21 11:35
草莓果實(shí)品質(zhì)受到很多因素的影響,其中包括遺傳因素、氣候條件和栽培技術(shù)如適時(shí)定植和水肥管理等。肥料是影響草莓果實(shí)品質(zhì)和產(chǎn)量的重要因素,然而國(guó)內(nèi)外關(guān)于磷(Phosphorus,P)對(duì)草莓生長(zhǎng)發(fā)育和果實(shí)品質(zhì)形成作用及其機(jī)制的報(bào)道卻很少。本研究以鳳梨草莓為試材,揭示了草莓果實(shí)可溶性固形物含量(Soluble solids content,SSC)與P含量之間存在著極顯著的正相關(guān)性。為了闡明P影響果實(shí)SSC的分子機(jī)制,從鳳梨草莓中分離克隆出3個(gè)PHO1基因,探明了其序列特征和表達(dá)特性,并通過對(duì)擬南芥和草莓的遺傳轉(zhuǎn)化分析了其功能。主要結(jié)果如下:1.分別對(duì)24個(gè)品種(系)草莓和同一品種‘幸香’不同采收日期草莓的整個(gè)果實(shí)中SSC與P含量進(jìn)行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)兩者均呈極顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為0.95和0.96。對(duì)草莓果實(shí)不同部位(尖部,中部,基部)中SSC與P含量進(jìn)行相差牲分析,發(fā)現(xiàn)兩者也呈極顯著正相關(guān),r=0.87。2.通過對(duì)‘艷麗’草莓施加不同濃度P肥(磷酸),驗(yàn)證了SSC與P含量之間的相關(guān)性。6.0 mM處理下,紅熟期果實(shí)中P含量和SSC均有了顯著提高,分別提高了45.0%和16.7%。6.0...
【文章來源】:沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:97 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的類型
1.1.1 PHT1家族
1.1.2 PHT2家族
1.1.3 PHO1家族
1.1.4 其他基因家族
1.2 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的調(diào)控因子
1.2.1 磷酸鹽
1.2.2 植物激素
1.2.3 糖信號(hào)
1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子
1.2.5 MicroRNA
1.3 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因PHO1研究進(jìn)展
1.4 草莓果實(shí)品質(zhì)與P相關(guān)性的研究
1.5 本研究的目的和意義
第二章 草莓果實(shí)可溶性固形物含量與磷含量的相關(guān)性
2.1 材料與方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 草莓果實(shí)SSC的測(cè)定
2.1.3 草莓P含量的測(cè)定
2.1.4 草莓總糖含量的測(cè)定
2.1.5 外源施加P肥驗(yàn)證
2.1.6 光合參數(shù)的測(cè)定
2.1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2.2 結(jié)果與分析
2.2.1 草莓果實(shí)中總糖含量占SSC的比例
2.2.2 草莓完整果實(shí)中P含量與SSC的相關(guān)性
2.2.3 草莓果實(shí)不同部位中P含量與SSC的相關(guān)性
2.2.4 追施P肥提高草莓植株P(guān)含量和果實(shí)SSC的作用
2.2.5 追施P肥對(duì)草莓植株光合效率的影響
2.3 討論
2.3.1 草莓糖含量與P含量的相關(guān)性
2.3.2 草莓植株P(guān)含量增加導(dǎo)致果實(shí)糖含量增加的機(jī)制
2.4 小結(jié)
第三章 草莓PHO1基因的序列特征和表達(dá)特性
3.1 材料與方法
3.1.1 植物材料
3.1.2 草莓總RNA提取
3.1.3 草莓總RNA質(zhì)量檢測(cè)
3.1.4 cDNA合成
3.1.5 PCR擴(kuò)增
3.1.6 PCR產(chǎn)物的凝膠回收
3.1.7 目的片段與T載體連接
3.1.8 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
3.1.9 重組質(zhì)粒PCR鑒定
3.1.10 重組質(zhì)粒提取
3.1.11 PHO1基因序列分析
3.1.12 PHO1基因表達(dá)檢測(cè)
3.1.13 外源施加P肥試驗(yàn)
3.1.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3.2 結(jié)果與分析
3.2.1 草莓PHO1基因的分離克隆
3.2.2 草莓PHO1基因的序列特征
3.2.3 草莓PHO1基因的表達(dá)特性
3.3 討論
3.3.1 PHO1蛋白的結(jié)構(gòu)域
3.3.2 PHO1基因的表達(dá)特性
3.4 小結(jié)
第四章 草莓PHO1基因的功能分析
4.1 材料與方法
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株及載體
4.1.3 過量表達(dá)載體構(gòu)建
4.1.4 RNAi載體構(gòu)建
4.1.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)制備
4.1.6 載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌
4.1.7 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
4.1.8 草莓遺傳轉(zhuǎn)化
4.1.9 轉(zhuǎn)化株系PCR鑒定
4.1.10 實(shí)時(shí)定量RT-PCR
4.1.11 植株P(guān)含量測(cè)定
4.1.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
4.2 結(jié)果與分析
4.2.1 草莓PHO1基因在擬南芥中異位表達(dá)及功能分析
4.2.2 在草莓中沉默F(xiàn)aPHO1;H9基因的功能分析
4.3 討論
4.3.1 PHO1基因與P含量的關(guān)系
4.3.2 PHO1基因的功能
4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)
5.1 結(jié)論
5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]栽培草莓果實(shí)中特異表達(dá)的bHLH78基因的克隆及過量表達(dá)載體構(gòu)建[J]. 豆玉娟,曹飛,馬躍,李賀,劉月學(xué),張志宏. 分子植物育種. 2014(03)
[2]‘紅顏’草莓菌根磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆及熒光定量表達(dá)分析[J]. 曹慶芹,鄧杰,朱麗靜,白雋帆,趙天,朱旭文,姜奕晨,邢宇,秦嶺. 園藝學(xué)報(bào). 2013(04)
[3]植物磷饑餓信號(hào)與激素信號(hào)相互作用[J]. 賴思晨,張揚(yáng),張?jiān)品?李玥,嚴(yán)勝柒. 植物生理學(xué)報(bào). 2012(12)
[4]‘幸香’草莓白肉突變體與野生型的生物學(xué)特性和品質(zhì)比較[J]. 梁燁,李賀,馬躍,曹飛,豆玉娟,張志宏. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(15)
[5]植物吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)磷素的分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 孫傳范,肖凱,韓勝芳,趙芳華,鮑金香. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2011(02)
[6]草莓果實(shí)發(fā)育過程中花色苷和黃酮醇類物質(zhì)的形成機(jī)制[J]. 張瓊,王紅清,冷平,賈樂新. 園藝學(xué)報(bào). 2008(12)
[7]Transcriptional Regulation and Signaling in Phosphorus Starvation: What About Legumes?[J]. Oswaldo Valds-López,Georgina Hernndez. Journal of Integrative Plant Biology. 2008(10)
[8]Signaling Components Involved in Plant Responses to Phosphate Starvation[J]. Hui Yuan and Dong Liu (Department of Biological Sciences and Biotechnology, Tsinghua University, Beijing 100084, China). Journal of Integrative Plant Biology. 2008(07)
[9]中國(guó)磷元素代謝模式的演化與分析[J]. 樊銀鵬,胡山鷹,陳定江,李有潤(rùn),沈靜珠. 清華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2008(06)
[10]植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因及其表達(dá)調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 王萍,陳愛群,余玲,徐國(guó)華. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào). 2006(04)
本文編號(hào):3637170
【文章來源】:沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:97 頁(yè)
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摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的類型
1.1.1 PHT1家族
1.1.2 PHT2家族
1.1.3 PHO1家族
1.1.4 其他基因家族
1.2 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的調(diào)控因子
1.2.1 磷酸鹽
1.2.2 植物激素
1.2.3 糖信號(hào)
1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子
1.2.5 MicroRNA
1.3 磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因PHO1研究進(jìn)展
1.4 草莓果實(shí)品質(zhì)與P相關(guān)性的研究
1.5 本研究的目的和意義
第二章 草莓果實(shí)可溶性固形物含量與磷含量的相關(guān)性
2.1 材料與方法
2.1.1 植物材料
2.1.2 草莓果實(shí)SSC的測(cè)定
2.1.3 草莓P含量的測(cè)定
2.1.4 草莓總糖含量的測(cè)定
2.1.5 外源施加P肥驗(yàn)證
2.1.6 光合參數(shù)的測(cè)定
2.1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2.2 結(jié)果與分析
2.2.1 草莓果實(shí)中總糖含量占SSC的比例
2.2.2 草莓完整果實(shí)中P含量與SSC的相關(guān)性
2.2.3 草莓果實(shí)不同部位中P含量與SSC的相關(guān)性
2.2.4 追施P肥提高草莓植株P(guān)含量和果實(shí)SSC的作用
2.2.5 追施P肥對(duì)草莓植株光合效率的影響
2.3 討論
2.3.1 草莓糖含量與P含量的相關(guān)性
2.3.2 草莓植株P(guān)含量增加導(dǎo)致果實(shí)糖含量增加的機(jī)制
2.4 小結(jié)
第三章 草莓PHO1基因的序列特征和表達(dá)特性
3.1 材料與方法
3.1.1 植物材料
3.1.2 草莓總RNA提取
3.1.3 草莓總RNA質(zhì)量檢測(cè)
3.1.4 cDNA合成
3.1.5 PCR擴(kuò)增
3.1.6 PCR產(chǎn)物的凝膠回收
3.1.7 目的片段與T載體連接
3.1.8 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
3.1.9 重組質(zhì)粒PCR鑒定
3.1.10 重組質(zhì)粒提取
3.1.11 PHO1基因序列分析
3.1.12 PHO1基因表達(dá)檢測(cè)
3.1.13 外源施加P肥試驗(yàn)
3.1.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3.2 結(jié)果與分析
3.2.1 草莓PHO1基因的分離克隆
3.2.2 草莓PHO1基因的序列特征
3.2.3 草莓PHO1基因的表達(dá)特性
3.3 討論
3.3.1 PHO1蛋白的結(jié)構(gòu)域
3.3.2 PHO1基因的表達(dá)特性
3.4 小結(jié)
第四章 草莓PHO1基因的功能分析
4.1 材料與方法
4.1.1 植物材料
4.1.2 菌株及載體
4.1.3 過量表達(dá)載體構(gòu)建
4.1.4 RNAi載體構(gòu)建
4.1.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)制備
4.1.6 載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌
4.1.7 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
4.1.8 草莓遺傳轉(zhuǎn)化
4.1.9 轉(zhuǎn)化株系PCR鑒定
4.1.10 實(shí)時(shí)定量RT-PCR
4.1.11 植株P(guān)含量測(cè)定
4.1.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
4.2 結(jié)果與分析
4.2.1 草莓PHO1基因在擬南芥中異位表達(dá)及功能分析
4.2.2 在草莓中沉默F(xiàn)aPHO1;H9基因的功能分析
4.3 討論
4.3.1 PHO1基因與P含量的關(guān)系
4.3.2 PHO1基因的功能
4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)
5.1 結(jié)論
5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]栽培草莓果實(shí)中特異表達(dá)的bHLH78基因的克隆及過量表達(dá)載體構(gòu)建[J]. 豆玉娟,曹飛,馬躍,李賀,劉月學(xué),張志宏. 分子植物育種. 2014(03)
[2]‘紅顏’草莓菌根磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的克隆及熒光定量表達(dá)分析[J]. 曹慶芹,鄧杰,朱麗靜,白雋帆,趙天,朱旭文,姜奕晨,邢宇,秦嶺. 園藝學(xué)報(bào). 2013(04)
[3]植物磷饑餓信號(hào)與激素信號(hào)相互作用[J]. 賴思晨,張揚(yáng),張?jiān)品?李玥,嚴(yán)勝柒. 植物生理學(xué)報(bào). 2012(12)
[4]‘幸香’草莓白肉突變體與野生型的生物學(xué)特性和品質(zhì)比較[J]. 梁燁,李賀,馬躍,曹飛,豆玉娟,張志宏. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(15)
[5]植物吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)磷素的分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 孫傳范,肖凱,韓勝芳,趙芳華,鮑金香. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2011(02)
[6]草莓果實(shí)發(fā)育過程中花色苷和黃酮醇類物質(zhì)的形成機(jī)制[J]. 張瓊,王紅清,冷平,賈樂新. 園藝學(xué)報(bào). 2008(12)
[7]Transcriptional Regulation and Signaling in Phosphorus Starvation: What About Legumes?[J]. Oswaldo Valds-López,Georgina Hernndez. Journal of Integrative Plant Biology. 2008(10)
[8]Signaling Components Involved in Plant Responses to Phosphate Starvation[J]. Hui Yuan and Dong Liu (Department of Biological Sciences and Biotechnology, Tsinghua University, Beijing 100084, China). Journal of Integrative Plant Biology. 2008(07)
[9]中國(guó)磷元素代謝模式的演化與分析[J]. 樊銀鵬,胡山鷹,陳定江,李有潤(rùn),沈靜珠. 清華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2008(06)
[10]植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因及其表達(dá)調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 王萍,陳愛群,余玲,徐國(guó)華. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào). 2006(04)
本文編號(hào):3637170
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