α-半乳糖苷酶,具有催化α-1,6-鍵結(jié)合的末端半乳糖殘基類物質(zhì)水解的作用。近年來,隨著對(duì)α-半乳糖苷酶研究的深入,逐漸將其應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品和飼料等工業(yè)中。本研究從香菇子實(shí)體中首次分離純化出該酶,并深入研究了其理化性質(zhì),同時(shí)優(yōu)化了香菇發(fā)酵產(chǎn)酶工藝。以香菇子實(shí)體為材料,通過離子交換層析和凝膠過濾層析,得到一種單亞基α-半乳糖苷酶LEGI,純化倍數(shù)為1051倍,純化后酶的比活為168U/mg,分子量為48kDa。該酶在酸性和常溫條件下具有良好的穩(wěn)定性,最適pH和最適溫度分別為5.0和60℃。SDS、EDTA、Hg2+、Ag+、Fe3+、Cd2+對(duì) LEGI 有強(qiáng)烈抑制作用,而 Cu2+對(duì) LEGI 有促進(jìn)。DTT對(duì)LEGI活力有顯著的提高,化學(xué)修飾劑NBS對(duì)LEGI有顯著的抑制作用,表明色氨酸是LEGI活性中心的必需基團(tuán),且LEGI活性中心附近有二硫鍵。LEGI具有抵抗胃蛋白酶、酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶的水解特性。在動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中,LEGI對(duì)底物pNPG、水蘇糖、棉子糖、蜜二糖的Km值分別為1.08mM、17.24mM、13.80mM、8.05mM,并且在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),半乳糖和蜜二糖對(duì)LEGI的... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１新鮮的香菇子實(shí)體（攝于太谷）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｆｒｅｓｈ?ｂｏｄｙ?ｏｆ?Ｌｅｎｄｎｕｌａ?ｅｄｏｄｅｓ?（ｐｈｏｔｏｅｄ?ｉｎ?Ｔａｉｇｕ）??

ＬＥＧＩ可以牢固的吸附在ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陰離子柱上，緩沖液和５０?ｍＭ?ＮａＣｌ??洗脫可以去除雜蛋白組分Ｄ１和Ｄ２，?２５０?ｍＭ?ＮａＣｌ可以將活性組分洗脫下來（Ｄ３和Ｄ４??組分），其中大部分活性主要集中于Ｄ３，?Ｄ４組分活性較低且雜蛋白較多，５００ｍＭＮａＣｌ??和１?Ｍ?ＮａＣｌ洗脫下較大量的雜蛋白組分Ｄ５和Ｄ６。將Ｄ３活性較高的組分合并收集，??并用蒸餾水充分透析。??３?ｒ：?７??

圖２－３香薇ａ－半乳糖苷酶Ｄ３組分的ＣＭ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ陽離子又換層析（ｐＨ?４．６）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｄ３?ｏｎ?ＣＭ－?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]珍稀食用菌繡球菌液體發(fā)酵工藝條件優(yōu)化[J]. 陳博文,常明昌,孟俊龍,徐麗婧,張小林,孫曉瑞,駱燕,杜紅霞.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(10)
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博士論文
[1]榆黃蘑、紅平菇和雙孢菇子實(shí)體中α-半乳糖苷酶理化性質(zhì)的研究[D]. 胡玉凈.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]α-半乳糖苷酶碳源誘導(dǎo)機(jī)制研究及復(fù)合酶制劑的開發(fā)[D]. 顧豐穎.浙江大學(xué) 2013

碩士論文
[1]香菇柄多肽的制備及其抗氧化活性研究[D]. 張璐.揚(yáng)州大學(xué) 2017
[2]黃瓜6種α-半乳糖苷酶生理功能初步研究[D]. 楊霞光.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[3]α-半乳糖苷酶高產(chǎn)菌株的篩選及其基因的克隆、表達(dá)、純化和性質(zhì)研究[D]. 賁培培.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



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