近些年來葡萄（Vitis vinifera L）果實中的有機酸含量因全球氣候變暖而嚴重不足,果實的著色和風(fēng)味受到不利影響,釀造的葡萄酒品質(zhì)和口感欠佳,嚴重影響了葡萄酒產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和經(jīng)濟效益。葡萄果實的有機酸中蘋果酸含量較高,能被高效代謝,受外界環(huán)境因素的影響較大,研究釀酒葡萄蘋果酸的合成與代謝、相關(guān)基因的表達調(diào)控顯得尤為重要。本研究首先以寧夏地區(qū)栽培面積最大的釀酒葡萄品種赤霞珠（Cabernet Sauvignon）為材料,從果實形成至成熟4個發(fā)育時期的果實中提取RNA進行轉(zhuǎn)錄組測序,同時對同一時期的果實中與蘋果酸關(guān)系比較密切的8種有機酸含量進行測定,篩選出影響赤霞珠果實中蘋果酸生物合成的關(guān)鍵酶類及其基因,并對其進行分離克隆、原核細胞表達和體外酶活性檢測;然后選擇3個葡萄栽培基地的赤霞珠為材料,從4個發(fā)育時期的果實中提取RNA,對這些關(guān)鍵基因進行實時熒光定量PCR（qPCR）驗證,并與同時期果實的有機酸含量進行顯著性差異檢驗和相關(guān)性分析,進一步研究這些關(guān)鍵基因在葡萄不同栽培地區(qū)、果實不同發(fā)育時期,對蘋果酸等有機酸生物合成與代謝的綜合影響和調(diào)控機制。該研究為今后培育優(yōu)質(zhì)釀酒葡萄奠定了分子基... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－３赤霞珠果實４個發(fā)育時期有機酸含量變化??注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤，《＝３．??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｏｒｇａｎ?

Ｓｔａｇｅ?Ｓｔａｇｅ??圖２－３赤霞珠果實４個發(fā)育時期有機酸含量變化??注：數(shù)據(jù)為平均值±標準誤，《＝３．??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｏｒｇａｎｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｃｏｎｔｅｎｔｓ?ａｔ?４?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｂｅｒｎｅｔ?Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ?ｆｒｕｉｔｓ??Ｎｏｔｅ?Ｄａｔａ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｍｅａｎｓ?士?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｅｒｒｏｒ．?？＝３．??２．２．４赤霞珠果實蘋果酸生物合成關(guān)鍵基因的篩選??根據(jù)轉(zhuǎn)錄組二代測序結(jié)果，利用這８種相關(guān)酶類的功能基因及其同源基因在硬果期、綠果??期、轉(zhuǎn)色期以及成熟期４個時期的基因表達量ＦＰＫＭ與同一樣本的８種有機酸含量進行加權(quán)基??因共表達網(wǎng)絡(luò)ＷＧＣＮＡ關(guān)聯(lián)分析（圖２－４）、韋恩差異基因表達分析篩選出與有機酸含量變化具??有較高相關(guān)性（ｒ＞±０．５）的基因為候選的關(guān)鍵基因（表２－４），進行下一步的基因克隆和功能驗??證：其中，ＰＫ催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸，其同源基因中基因表達量與磷酸烯醇式丙??酮酸、丙酮酸含量呈較高正相關(guān)關(guān)系的有６個，而與丙酮酸含量呈較高負相關(guān)關(guān)系的有４個，??選取?ＶＩＴ＿０８ｓ０００７ｇ０４１７０、ＶＩＴ＿１６ｓ００５０ｇ０２６６０?基因（ＣｓＰＡ７，?ＣｖＰＡ：２）；?ＰＤＨ?催化丙酮酸生成??乙酰輔酶Ａ，其同源基因中基因表達量與丙酮酸含量呈較高正負相關(guān)關(guān)系的各有５個，選取??ＶＩＴ＿０１ｓ００２６ｇ００９９０、ＶＩＴ＿ｌｌｓ００１６ｇ０１８７０?基因ＰＥＰＣ?催化磷酸烯醇式丙??酮酸生成草酰乙酸

寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文?第三章赤霞珠果實蘋果酸生物合成關(guān)鍵基因的克隆和酶活性檢３．１．３赤霞珠蘋果酸生物合成關(guān)鍵基因的原核表達載體構(gòu)建??３．１．３．１帶有ｐＴｒｃ－ＣＫＳ載體相應(yīng)末端序列的目的基因擴增??設(shè)計帶有原核表達載體ｐＴｒｃ－ＣＫＳ限制性內(nèi)切酶５ａ／ｗ／／?Ｉ和￡ｃｏ／？?Ｉ相應(yīng)末端序列的引物，??以上一節(jié)克隆到ＴＡ載體攜帶目的基因的ｐＭＤ１８－Ｔ?Ｓｉｍｐｌｅ?Ｖｅｃｔｏｒ為模板，擴增１６個關(guān)鍵基（表?３－５）。??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]鮮食葡萄果實糖酸組分遺傳及葡萄糖苷酶基因的表達研究[D]. 張國軍.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]河北昌黎5個釀酒葡萄品種比較研究[D]. 陳海菊.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



本文編號：3602475