菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat.）原產(chǎn)我國(guó),是世界四大切花與我國(guó)十大名花之一,觀賞與經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高。蚜蟲是菊花最重要的害蟲,嚴(yán)重影響菊花的產(chǎn)量與品質(zhì)。目前,蚜蟲防治多采用化學(xué)方法,不僅消耗了大量人力物力、,對(duì)環(huán)境造成污染,而且農(nóng)藥的殘留使得蚜蟲群體產(chǎn)生抗藥性。蚜蟲的防治已成為菊花生產(chǎn)中的一大難題。MYB轉(zhuǎn)錄因子功能眾多,參與到植物的各種生命活動(dòng)中,已有報(bào)道MYB轉(zhuǎn)錄因子參與植株抗蚜蟲過(guò)程中的調(diào)節(jié)。然而在菊花中,關(guān)于MYB基因抗蚜性的研究尚未見報(bào)道。本文從菊花中克隆得到了兩個(gè)MYB基因CmMYB58.1、CmMYB58.2,并對(duì)其表達(dá)特性、轉(zhuǎn)錄激活活性及亞細(xì)胞定位等進(jìn)行了研究;通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)化菊花’神馬’,獲得了超表達(dá)植株,并對(duì)其抗蚜性進(jìn)行了鑒定;通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因株系的木質(zhì)素合成相關(guān)基因表達(dá)量的分析,初步探究了 MYB基因的抗蚜性機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.采用RT-PCR和RACE-PCR技術(shù),從菊花中克隆得到2個(gè)菊花MYB基因CmMYB58.和 CmMYB58.2。經(jīng)序列分析,CmMYB58.1基因的 ORF 為 753bp,編碼251... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２木質(zhì)素生物合成途徑（Ｚｈａｏ?ｅｔａｌ，?２０１１）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｌｉｇｎｉｎ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?（Ｚｈａｏ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??

的ｃＤＮＡ全長(zhǎng)序列，用全長(zhǎng)引物和高保真酶進(jìn)行ＰＣＲ，亞克隆測(cè)序以保證序列信息的??真實(shí)性。根據(jù)全長(zhǎng)序列用軟件分析出最大開放閱讀框ＯＲＦ序列，并設(shè)計(jì)ＯＲＦ引物（表??２－１）進(jìn)行ＰＣＲ反應(yīng)，分別得到７５３ｂｐ和６００ｂｐ的片段（圖２－１Ａ２，Ｂ２），經(jīng)測(cè)序再??次驗(yàn)證，從而獲取了目的基因的全長(zhǎng)和ＯＲＦ序列信息。??７５０ｂｐ??Ｉ?Ｉ?５Ｄ０ｂｐ?５００ｂｐ?Ｉ??圖２－１菊花ＣｗＭｒａＪＳ．／和基因的ＰＣＲ擴(kuò)增??Ａ１：?Ｃ：ｍｙＶ／ｒ／ｉ兄．／?中間?Ｊ?ｉ?段；八２：?Ｃ：ｍＡ／ｒ／Ｕ況?／?〇ｍ：??Ｂｌ：?中間廠丨？段；Ｂ２：?ＣｍＡ／＞７ｉ５５．２０ＲＦ??Ｍ：?２００（Ｈ）ＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１：?Ｈ?標(biāo)片段??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣｍＭＹＢ５８．１?ａｎｄ?ＣｍＭＹＢ５８．２??Ａ１：?Ｔｈｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ＣＶｗＡ／ＫＺ＾Ｓ．?／；?Ａ２：?Ｔｈｅ?ＯＲＦ?ｏｆ?ＯｗＡ／ｙＴＯＳ．?／??Ｂ１：?Ｔｈｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?２；?Ｂ２：?Ｔｈｅ?ＯＲＦ?ｏｆ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｉ?ｈｅ?ｏｂｊｅｃｔ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??２．２菊花ＣｍＭ７＾５＆／和基因序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系??２．２．１序列分析??將兩個(gè)基因在?ＮＣＢＩ?（?Ｎａｔｉｏｎａｌ?Ｃｅｎｔｅｒ?ｏｆ?Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，??１９??

?２．２?ＣｍＭＫＳＪｃＳ．／和Ｃ：ｗＭ７５５＆２在不同組織器官中的表達(dá)分析??如圖３－２所示，ＣＷＭＹＢ５＆７和ＯｎＭＦ５５＆２兩個(gè)基因在菊花的根、莖和葉中都有??表達(dá)，且兩個(gè)基因都是在葉片中表達(dá)量最高，在莖中的表達(dá)量次之，而在根中的表達(dá)??量最低。其中ＣｍＭ７５５＆／在葉片和莖中的表達(dá)量無(wú)明顯差異，但明顯高于根，而??在葉片中的表達(dá)量明顯高于根和莖，表明和兩??個(gè)基因在不同的組織器官中可能發(fā)揮著不同的作用。??９０??｜?８０?ＤＣｍＭＹＢ５８．１?□?ＣｍＭＹＢ５８．２?ｊ—ｆ—，??＾?７０??■ｉ?６０??Ｓ?５０??ｘ?４０??＾?３０?ｒ－＾－Ｗ??ｉ２０?－??Ｓ?１０??０?——１?１?一?－??Ｌ—Ｊ?１?Ｌ—１??ｒｏｏｔｓ?ｓｔｅｍｓ?ｌｅａｖｅｓ??圖３－２?ＯｗＭｙＳ５Ｓ．７和ＣｗＭｒａＪＳＪ在菊花各組織中的表達(dá)模式??Ｆｉｇ．３－２?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＣｍＭＹＢ５８．１?ａｎｄ?ＣｍＭＹＢ５８．２?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??ｏｆ?ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ．??２．３轉(zhuǎn)錄激活活性和亞細(xì)胞定位分析??２．３．１?ｐＥＮＴＲｌＡ－ＣｗＭ７５兄Ｊ?載體的獲得??設(shè)計(jì)含有酶切位點(diǎn)和別的引物，以含有目的片段的ｐＭＤ１９－Ｔ的質(zhì)粒為??模板進(jìn)行高保真擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物如圖３－３?Ａ所示；用和勒〇／快切酶分別對(duì)入門??載體ｐＥＮＴＲｌ?Ａ和圖３－３?Ａ中目的基因純化回收產(chǎn)物進(jìn)行雙酶切，如圖３－３?Ｂ所示；將??圖３－３?Ｂ中的目的片段純化回收后進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3565017