發(fā)布時間：2022-01-02 02:24

　　百合是多年生鱗莖植物,屬百合科（Liliaccae）百合屬（Lilium）植物。種質(zhì)資源保存為新品種選育和遺傳改良提供了基因資源。病毒病害是制約百合生產(chǎn)的關(guān)鍵因素之一。病毒檢測是病毒病防治、無毒苗生產(chǎn)和海關(guān)檢驗檢疫的必備技術(shù)。本研究以百合試管苗為試材,旨在（1）創(chuàng)建百合莖尖超低溫保存的新技術(shù),為百合種質(zhì)資源超低溫基因庫的建立提供了技術(shù)平臺;（2）初步建立了百合莖尖超低溫療法脫毒技術(shù);（3）建立百合病毒的TAS-ELISA、RT-PCR、直接微樣RT-PCR（microtissue direct RT-PCR,MD RT-PCR）和免疫組織化學(xué)定位法等多種病毒檢測技術(shù)。本研究主要結(jié)果如下:1.以‘西伯利亞’百合（Lilium Oriental hybrid‘Siberia’）為試材,建立了帶不定芽葉片小塊超低溫保存技術(shù)。將百合的葉片外植體培養(yǎng)在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,培養(yǎng)12天后,從葉片外植體上切取至少攜帶一個不定芽的葉方形小塊（Small leaf squares,SLS,3×4mm）。將SLSs培養(yǎng)在含有0.5 M蔗糖的預(yù)培養(yǎng)基上培養(yǎng)1天,用有加載溶液處理20分鐘,隨后在0°C條件下,將... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

幾個著名的百合品種注：a.‘西伯利亞’

圖 1-2 幾種常用的食用蘭州百合。注：A.甘肅蘭州大面積栽培的蘭州百合。B.蘭州百合的花。C.蘭州百合鱗莖。D.龍牙百合。D1. 龍牙百合鱗莖. E.卷丹百合。Fig 1-2 Some most frequently-grown edible Lilies.ote：A. Field-grown Lanzhou lilies. B. Flowers of Lanzhou lily. C. Scale bulbs of Lanzhou lily. D. Liliumbrownii var.viridulum. D1. Scale bulbs ofLilium brownii var.viridulum. E. Lilium lancifolium.百合試管苗保存也有大量研究。陳輝等（2006）的研究發(fā)現(xiàn)，‘西伯利亞’百合 (L.riental hybrid‘Siberia’) 試管苗保存 9 個月后，存活率在 80%以上。萬珠珠等（2016）道了三種食用百合的試管苗保存，龍芽百合和蘭州百合保存 300 天后的存活率分別為6%和 94%, 川百合保存 150 天后的存活率為 100%。張玉芹等（2010，2011）對食用百的離體保存的研究也獲得了較理想的結(jié)果。國外學(xué)者也對百合試管苗中短期保存做了量研究，保存時間長達 28 個月 (Bonnier et al. 1997)。試管苗保存需要無菌條件，占空間較大，費時、費工，成本較高；試管苗保存需要繼代培養(yǎng)，可能誘導(dǎo)保存材料發(fā)遺傳變異，并可能造成保存材料的污染，導(dǎo)致保存材料的喪失 (van Tuyl et al. 2011)。些缺點極大地限制了百合的試管苗保存。

圖 2-1 東方百合‘西伯利亞’葉再生不定芽的 9d，12d，15d 形態(tài)學(xué)和組織學(xué)觀察圖注：（a，b）培養(yǎng) 9 天時不定芽的生長情況；（c，d）培養(yǎng) 12 天時不定芽的生長情況；（e，f）培養(yǎng)15 天時不定芽的生長情況。AD=頂端分生組織，LP=葉原基。a，c 和 e 比例尺為 1mm，b 和 d 比例尺為 20 μm，f 比例尺為 0.5mm。Fig.2-1 Morphological and histological observations of adventitious bud formation on SLSs of L.Oriental hybrid ‘Siberia’.Note: 9-(a, b), 12-(c, d) and 15- (e, f) day-old adventitious buds.AD apical dome, LP leaf primordium.Bars in a, c and e = 1mm, in b and d = 20μm, and in f = 0.5mm.2.4.3 SLSs 的超低溫保存將 SLSs，在加載液中浸沒 20 min，接著在 0°C 條件下，用 PVS2 脫水處理 4-9 h。將脫水處理后的 SLSs 轉(zhuǎn)移到用鋁箔制成的小皿之上（直徑 7 cm），快速投入液氮之中，凍存 1h（+LN）。處理結(jié)束后，用鑷子快速撈出帶有 SLSs 的鋁箔小皿，投入卸載液之中解凍及復(fù)溫 20 min。將經(jīng)過超低溫處理的 SLSs 轉(zhuǎn)移到 BM 培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)間溫度

【參考文獻】：
期刊論文
[1]蘭州百合粉營養(yǎng)成分及水分活度研究[J]. 吳霞明.  中國食物與營養(yǎng). 2017(10)
[2]三種食用百合種質(zhì)資源限制生長保存及遺傳穩(wěn)定性研究[J]. 萬珠珠,牛來春,譚秀梅,劉敏,吳亮,董草.  北方園藝. 2016(13)
[3]百合種球脫毒技術(shù)研究進展[J]. 胡新穎,楊迎東,顏津?qū)?顏范悅.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(04)
[4]卷丹百合脫毒快繁技術(shù)研究[J]. 周曉波,吳藝飛,丁茁荑.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2012(31)
[5]食用百合種質(zhì)資源離體保存技術(shù)研究[J]. 張玉芹,李錫香,王海平.  北方園藝. 2011(02)
[6]食用百合試管苗緩慢生長保存的研究[J]. 張玉芹,馮建軍,趙景芳.  中國蔬菜. 2010(24)
[7]莖尖培養(yǎng)及熱處理技術(shù)在百合脫毒中的應(yīng)用研究[J]. 高慧卿,樊蘭瑛,王秀紅,高宏樟.  山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(06)
[8]百合的脫病毒、快速繁殖技術(shù)的研究[J]. 邵增龍,高山林,黃和平,嵇恂,馬莉.  藥物生物技術(shù). 2010(03)
[9]東方百合快繁培養(yǎng)基優(yōu)化與脫毒技術(shù)研究[J]. 鐘海豐,黃宇翔,鄧朝生,江斌.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2009(17)
[10]食用百合脫毒快繁技術(shù)研究[J]. 陳麗,唐寅,張承妹,董舉文,宋學(xué)孟.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2009(02)

博士論文
[1]葡萄莖尖超低溫保存及超低溫療法脫毒研究[D]. 畢文璐.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017

碩士論文
[1]東方百合病毒檢測與莖尖超低溫脫毒研究[D]. 靳慧潔.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[2]中國野生百合資源調(diào)查及遺傳多樣性分析[D]. 王潔瓊.北京林業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3563282