香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴專化型（Fusarium oxysporuw f.sp.cubense,Foc）引起的土傳維管束香蕉病害,已經(jīng)對(duì)全球香蕉產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重影響。由于香蕉抗性栽培品種的缺乏,以及對(duì)香蕉抗病和病原菌致病分子機(jī)理的不清楚等原因,目前還沒(méi)有真正十分有效的防治方法。為了解香蕉抗枯萎病的分子機(jī)理,本研究在利用綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記菌株和掃描電鏡比較觀察Foc4和Foc1侵染過(guò)程的基礎(chǔ)上,進(jìn)行香蕉轉(zhuǎn)錄組和病原菌處理后的香蕉數(shù)字表達(dá)譜分析。同時(shí),為了闡明枯萎病菌的致病分子機(jī)理和分析香蕉-Foc互作,開展了 Foc4和Foc1分別與巴西蕉共培養(yǎng)的培養(yǎng)液比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析,為香蕉抗病品種培育提供方向及防治藥物開發(fā)提供靶標(biāo)。主要研究結(jié)果如下:（1）利用GFP標(biāo)記的Foc1和Foc4菌株,通過(guò)激光共聚焦顯微觀察發(fā)現(xiàn),侵染之后,Foc1和Foc4均能夠粘附巴西蕉根毛和根表皮細(xì)胞,并隨后均能夠侵入根的維管束組織。侵染2個(gè)月后,在巴西蕉球莖的維管束中觀察到Foc4卻沒(méi)有觀察到Focl。同時(shí),通過(guò)掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn),Foc4能夠經(jīng)過(guò)細(xì)胞間隙和傷口侵入巴西蕉根表皮,而Focl主要經(jīng)過(guò)傷口不能經(jīng)過(guò)... 

【文章來(lái)源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖３－１酶解獲得的原生質(zhì)體（Ａ）與Ｆｏｃ４?（Ｂ）和Ｆｏｃｉ?（Ｃ）轉(zhuǎn)化子激光共聚焦顯微圖??Ｆｉｇ．３－１?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?（Ａ）?ａｎｄ?ＧＦＰ?ｔａｇｇｅｄ?Ｆｏｃ４?（Ｂ）?ａｎｄ?Ｆｏｃｉ?（Ｃ）??

３．?１．?１?Ｆｏｃ４?和?Ｆｏｃｉ?菌株?ＧＦＰ?標(biāo)記??（１）原生質(zhì)體形態(tài)與ＧＦＰ轉(zhuǎn)化子鑒定??菌絲通過(guò)酶解獲得圓球狀的的原生質(zhì)體（圖３－１Ａ），濃度近１０８?ｓｐｏｒｅｓ／ｍＬ，能夠??滿足轉(zhuǎn)化要求。原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化后，在２００?ｐｇ／ｍＬ潮霉素ＰＤＡ平板上能夠形成轉(zhuǎn)化子，??Ｆｏｃｉ和Ｆｏｃ４分別獲得４和８?jìng)�(gè)轉(zhuǎn)化子。熒光觀察發(fā)現(xiàn)，從ＰＤＡ潮霉素抗性培養(yǎng)基上??長(zhǎng)出的所有轉(zhuǎn)化子，均能夠在激光共聚焦顯微鏡４８０?ｎｍ激發(fā)光發(fā)出綠色熒光。繼代??５次后還能發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光（圖３－１Ｂ，Ｃ）。說(shuō)明這些轉(zhuǎn)化子的ｇｆｐ基因己被轉(zhuǎn)入??到菌株中，性狀穩(wěn)定。??■■■??圖３－１酶解獲得的原生質(zhì)體（Ａ）與Ｆｏｃ４?（Ｂ）和Ｆｏｃｉ?（Ｃ）轉(zhuǎn)化子激光共聚焦顯微圖??Ｆｉｇ．３－１?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?（Ａ）?ａｎｄ?ＧＦＰ?ｔａｇｇｅｄ?Ｆｏｃ４?（Ｂ）?ａｎｄ?Ｆｏｃｉ?（Ｃ）??對(duì)繼代５次轉(zhuǎn)化子進(jìn)行ＰＣＲ檢測(cè)，結(jié)果表明，Ｆｏｃｉ?００５，?Ｆｏｃ４?００１，轉(zhuǎn)化子均擴(kuò)??增出一條４１７?ｂｐ的目的片段（圖３－２），進(jìn)一步說(shuō)明ｇｆｐ基因己經(jīng)轉(zhuǎn)入到菌株中，并??具良好的穩(wěn)定性。??５００ｂｐ?—??２５０ｂｐ?—ＨＢ??圖３－２轉(zhuǎn)化子的ＰＣＲ檢測(cè)??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＧＦＰ?ｔａｇｇｅｄ?Ｆｏｅ??Ｍ：２０００Ｍａｒｋｅｒ；ｌ：質(zhì)粒對(duì)照；２：?Ｆｏｃｌ００５

海南大學(xué)博士學(xué)位論文??（２）?ＧＦＰ標(biāo)記菌株的菌落形態(tài)與致病性??ＰＤＡ平板上的轉(zhuǎn)化子與野生型對(duì)比如圖３－３所示，轉(zhuǎn)化子在ＰＤＡ上的長(zhǎng)勢(shì)和菌??落形態(tài)與野生型基本一致。玻璃紙穿透實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，轉(zhuǎn)ｇｆｐ基因?qū)D(zhuǎn)化子的穿透??并沒(méi)有影響（圖３－４）。??圖３－３轉(zhuǎn)化子與野生型在ＰＤＡ平板上對(duì)比??Ｆｉｇ．３－３?Ｇｒｏｗｔｈ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＧＦＰ－ｔａｇ?ｓｔｒａｉｎ?ｗｉｔｈ?ｗｉｌｄｔｙｐｅ?ｉｎ?ＰＤＡ??Ａ：Ｆｏｃｌ?野生型，Ｂ：?Ｆｏｃｌ－ＧＦＰ，?Ｃ：?Ｆｏｃ４－ＧＦＰ，?Ｄ：?Ｆｏｃ４?野生型??Ｆｏｃ４?ｆ?Ｆｏｃ４？ｇｆｐ?’?Ｆｏｃｉ?＾?Ｆｏｃｌ－ｇｆｐ?＾??ｉ?處??圖３－４玻璃紙穿透實(shí)驗(yàn)??Ｆｉｇ．３－４?Ｃｅｌｌｏｐｈａｎｅ?ｐｅｎｅｔｒａｔｅｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ??利用盆栽巴西蕉對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行致病性測(cè)定。采用球莖切開法觀察香蕉維管束癥狀，??接種一個(gè)月后，香蕉出現(xiàn)黃葉枯萎時(shí)，將香蕉球莖切開拍照，結(jié)果如圖３－５所示，與??野生型相比，Ｆｏｃ４轉(zhuǎn)化子對(duì)巴西蕉和“廣粉１號(hào)”的致病性不變、Ｆｏｃｉ對(duì)“廣粉１??號(hào)”的致病性不變，對(duì)巴西蕉不致病。??圖３－５接種香蕉球莖維管束癥狀圖??Ｆｉｇ．３－５?ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍ?ｂａｎａｎａ?ｃｏｒｍ??Ａ：Ｆｏｃ４－ｇｆｐ接種“廣粉１號(hào)”

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3525022