發(fā)布時間：2021-11-26 04:55

　　果蔬中的花青素含量因其抗氧化功能,有益健康,倍受人們關(guān)注。番茄是常見的食用果蔬作物,但普通野生番茄果實卻很少積累花青素,因此,探索花青素合成的分子機制,培育富含花青素的番茄果實,一直是育種科學(xué)家的研究目標。Aft基因型番茄LA1996,源于野生種（Solanum.chilense）,果實中可積累花青素且受光誘導(dǎo)調(diào)控。研究表明,除了轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和結(jié)構(gòu)基因參與光調(diào)控花青素的合成代謝外,Small RNA也參與并調(diào)控了花青素的合成,但這些sRNA在番茄果實光誘導(dǎo)花青素合成代謝的分子調(diào)控基理還不清楚。本研究以Aft型番茄為主要試材,對Aft番茄不同時期果實進行光照和黑暗處理。將處理的番茄果實提取總RNA后,純化短片段RNA并進行小RNA深度測序分析,得到了 microRNA828和microRNA858兩個重要miRNA,預(yù)測其靶基因并鑒定作用位點。檢測不同品種不同時期在光誘導(dǎo)下的花青素差異表達以及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的差異表達;根據(jù) ceRNA（competing endogenous RNAs）理論構(gòu)建 miR828 相關(guān)的 pCAMBIA1300重組植物表達載體并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別侵染了擬南芥... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－３?Ｓｌ－Ｉ－Ｄ樣品中ｍｉｃｒｏＲＮＡ的酋位堿基偏好性??

?２不同發(fā)育時期番茄果實�。遥危辽疃葴y序分析及相關(guān)靶基因驗證???ｍｉＲＮＡ?Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?Ｂｉａｓ?ａｉ?Ｅａｃｈ?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?（Ｓ１＿１＿Ｄ）??丨綱??１?２?３?ｔ?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４?１５?－６?１７?１８?１９?２Ｃ?２１?２２??Ｐｏｓｉｔｉｏｎ??圖２－４?Ｓ?ｉ－ＮＤ樣品中ｍｉｃｒｏＲＮＡ各個位置堿基的偏好性??２．４．１．５?ＧＯ富集分析??ＧＯ數(shù)據(jù)庫適用于各個物種，能對基因、蛋白質(zhì)進行限定和描述。ＧＯ分析按照細??胞組分?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ、分子功能?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、生物學(xué)過程?Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ??Ｐｒｏｃｅｓｓ對基因進行分類，從而給出差異表達ｍｉＲＮＡ靶基因與哪些生物學(xué)功能顯著相關(guān)??（附圖１）。??２．４．１．６?ＫＥＧＣ；通路分析??在植物中，不同的基因雖然有著不同功能但基因間的相互合作與影響也是不ｉｉＪ■忽視??的，因此基于Ｐａｔｈｗａｙ分析可以幫助理解不同基因的功能。ＫＥＧＧ收錄了大Ｍ?Ｐａｔｈｗａｙ??數(shù)據(jù)庫，針對預(yù)測出的新ｍｉＲＮＡ以及其靶基「Ａ？丨推測該ｍｉＲＮＡ行駛的功能。通過??ＫＥＧＧ分析發(fā)現(xiàn)朽一個差異表達的蕋閃參心了類黃剛的．生物合成通路，候選靶越因ＩＤ??為?Ｓｏｌｙｃ０４ｇ０６３２１０．３?和?Ｓｏｌｙｃ０１ｇ００９３７０．２?（附圖?２）。??２．４．１．７光照／黑暗誘導(dǎo)下的ｍｉＲＮＡ與花青素合成代謝基因的差異表達分析??ｍｉ?ＲＮＡ勞異表達的輸入數(shù)據(jù)為ｍｉＲＮＡ表達水平分析中得到的ｒｅａｄｃｏｕｎｔ數(shù)據(jù)。對??于有生物學(xué)重復(fù)的樣品，分析我們采用基于負二項分布的ＤＥＳｅｑ標準

圖２－７巢式ＰＣＲ結(jié)果??Ｍ：ＤＭ２０００；?１：?ＳＧＮ－Ｕ?３１９３８６；?２：?ＳＧＮ－Ｕ３１７６９４；?３：?ＳＧＮ－Ｕ３２８７４６；?４：?ＳＧＮ－Ｅ７４６７４７??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]彩色馬鈴薯中miR858表達及其花青素含量變化分析[J]. 范菠菠,劉旭婷,陳燕福,武小娟,趙娜勤,于卓,馬艷紅.  分子植物育種. 2020(17)
[2]MicroRNA828負調(diào)控缺磷脅迫誘導(dǎo)的番茄花青素生物合成[J]. 賈小云,劉慧,沈潔,李芳,丁娜,孫巖,高昌勇,李潤植.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(15)
[3]擬南芥At-pri-miR828基因的克隆及其對番茄的遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 賈小云,于治芹,梁建萍,唐貴良,金雷皓,張莉,賀立恒,李潤植.  園藝學(xué)報. 2013(12)
[4]Small RNA biology:From fundamental studies to applications[J]. LI ZhengHe,ZHOU XuePing.  Science China（Life Sciences）. 2013(11)
[5]植物小RNAs及其抗脅迫機制研究進展[J]. 黃敏,何世斌,馬璐,李立家.  氨基酸和生物資源. 2009(02)



本文編號：3519439