日本原產完全甜柿（簡稱“日本甜柿”或JPCNA）自然脫澀是隨果實發(fā)育其果肉中單寧細胞的數(shù)量相對其他鞣細胞而言所占比例下降（俗稱“稀釋效應”）所致,而中國原產完全甜柿（簡稱“中國甜柿”或CPCNA）自然脫澀不僅與“稀釋效應”有關,而且與果實成熟前可溶性單寧向不溶性單寧的轉變（俗稱“凝固效應”）具有更為直接的關系。前人研究已經明確,中國甜柿自然脫澀與乙醛代謝關鍵酶基因ADH和PDC密切相關。本研究選擇中國甜柿‘羅田甜柿’和‘鄂柿1號’為試材,同時以日本甜柿‘陽豐’和非完全甜柿‘磨盤柿’作為對照,首先克隆獲得ADH和PDC家族成員全長,并比較不同脫澀類型品種中該基因序列差異性;進而,通過染色體步移法分離獲得ADH和PDC家族成員啟動子序列;以‘羅田甜柿’不同組織（花、葉片、莖段、萼片、果皮、果肉、果心和種子）、不同時期（花后2.5、5、10、15、20和25周）樣品為試材,構建其酵母雜交cDNA文庫;最后,基于ADH和PDC啟動子序列構建載體并用于酵母雜交cDNA文庫篩選。以期篩選出與中國甜柿自然脫澀相關的轉錄因子,從而為闡明其自然脫澀的分子調控網絡提供科學依據。主要研究結果如下:1.利用N... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 課題的提出
    1.2 前人研究進展
        1.2.1 柿單寧研究進展
        1.2.2 柿單寧凝固效應研究進展
        1.2.3 植物基因啟動子結構分析
        1.2.4 酵母單雜交系統(tǒng)
    1.3 本課題研究內容
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 基因全長擴增
        2.2.2 啟動子克隆
        2.2.3 cDNA文庫的建立
        2.2.4 載體構建及文庫篩選
3 結果與分析
    3.1 總RNA提取和質量檢測
    3.2 總DNA提取和質量檢測
    3.3 不同品種ADH和PDC全長擴增
        3.3.1 不同品種ADH基因cDNA全長擴增
        3.3.2 不同品種PDC基因cDNA全長擴增
    3.4 不同品種ADH和PDC基因啟動子克隆
    3.5 ‘羅田甜柿’酵母雜交cDNA文庫構建
        3.5.1 mRNA分離與質量檢測
        3.5.2 cDNA文庫（Uncut型）質量檢測
        3.5.3 酵母雜交AD-cDNA文庫質量檢測
    3.6 酵母單雜交文庫篩選
        3.6.1 pPDC2-AbAi載體構建
        3.6.2 Y1HGold[pPDC2-AbAi]誘餌菌株構建
        3.6.3 最低Ab A抑制濃度篩選
        3.6.4 Y1HGold[pPDC2-AbAi]菌株文庫篩選
4 討論
    4.1 不同脫澀類型柿品種ADH和PDC基因序列保守性和差異性
    4.2 基于啟動子序列研究相關基因功能的可能性
    4.3 中國甜柿‘羅田甜柿’酵母雜交AD-cDNA文庫構建及其意義
5 進一步工作設想
參考文獻
附錄
作者簡歷及在學期間的科研活動
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]真核生物啟動子研究概述[J]. 李圣彥,郎志宏,黃大昉.  生物技術進展. 2014(03)
[2]一種改良的植物DNA提取方法[J]. 李金璐,王碩,于婧,王玲,周世良.  植物學報. 2013(01)
[3]‘紅陽’獼猴桃cDNA文庫構建及F3H基因的表達初探[J]. 楊紅麗,王彥昌,姜正旺,黃宏文.  遺傳. 2009(12)
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[6]柿子單寧對幾種蛇毒中主要酶的抑制作用及其機理初探[J]. 顧海峰,梁晉鄂,李春美,張潔,竇宏亮.  中國農業(yè)科學. 2008(03)
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[8]部分中國原產甜柿種質果實脫澀類型的鑒定[J]. 張永卓,張艷芳,羅正榮.  園藝學報. 2006(02)
[9]高等植物啟動子功能和結構研究進展[J]. 夏江東,程在全,吳渝生,季鵬章.  云南農業(yè)大學學報. 2006(01)
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博士論文
[1]中國原產完全甜柿自然脫澀機理研究[D]. 王燕.華中農業(yè)大學 2010

碩士論文
[1]與柿單寧自然凝固相關的ALDH2基因家族克隆與表達分析[D]. 丁金鴿.華中農業(yè)大學 2015
[2]中國原產完全甜柿‘鄂柿1號’自然脫澀特點研究[D]. 陳道明.華中農業(yè)大學 2008



本文編號：3514261