核桃（Juglans regia L.）是世界4大堅(jiān)果之一,是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)林樹種,也是新疆自治區(qū)的特色林果。核桃有早實(shí)和晚實(shí)之分,早實(shí)核桃一般三年就能開花結(jié)實(shí),多數(shù)2³年開花,少數(shù)品種可當(dāng)年開花。早實(shí)性是核桃的重要性狀,具有較高的遺傳力。核桃花芽分化研究對(duì)于核桃品種改良、提質(zhì)增效具有重要意義。本研究選用早實(shí)核桃‘新新2’雌花芽不同分化期的雌花芽（F₁、F₂和F₃）和臨界分化期葉芽（JRL）,構(gòu)建small RNA（小RNA）和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù),篩選雌花芽分化的關(guān)鍵miRNA,對(duì)其靶基因進(jìn)行驗(yàn)證和表達(dá)分析。主要結(jié)果如下:（1）轉(zhuǎn)錄組測(cè)序拼接到132154個(gè)Unigene。不同分化期雌花芽間有差異基因2688個(gè),臨界期雌花芽與葉芽間有差異基因551個(gè)。小RNA測(cè)序獲得123個(gè)miRNA,包括51個(gè)已知miRNA和72個(gè)新miRNA。在不同分化期雌花芽及臨界期雌花芽與葉芽間共獲得55個(gè)差異表達(dá)miRNA,包括17個(gè)已知miRNA和38個(gè)新miRNA。jre-miR157a-5p—SPL、jre-miR16... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：150 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

miRNA介導(dǎo)的植物開花途徑（TeotiaandTang，2015）

1-2 植物 miRNA 的生物合成（Bartel et al.，2004re 1-2 miRNAbiogenesis in plants （Bartel et al.，20機(jī)制基因的結(jié)合大多數(shù)位于 3＇-非翻譯區(qū)（3＇-untransl5＇-非翻譯區(qū)（5＇-untranslated region，5＇-UTR）種：轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)靶 mRNA 的剪切降解、抑制翻譯和 RISC 中后通過堿基互補(bǔ)配對(duì)特異地識(shí)別靶基因 m為，如果 miRNA 與靶基因 mRNA 完全互補(bǔ)配對(duì)， 使其降解，反之則抑制靶基因 mRNA 的翻譯（Bar；Park et al.，2005 ）。在植物中，由于 miRNA 與靶配對(duì)，miRNA 主要通過對(duì)靶 mRNA 的剪切作用導(dǎo)致位點(diǎn)多位于 3＇-UTR，miRNA 對(duì) mRNA 的剪切產(chǎn)檢測(cè)。5＇RACE 回收片段表明，miRNA 對(duì)其靶 mR的第 9、10 或 11 位堿基（Emery et al.，2003；Milla靶mRNA 的剪切降解作用外，也有一些miRNA通過

法A 提取、cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建及 small RNA 測(cè)序態(tài)鑒定結(jié)果（Quan et al.，2019），對(duì)早實(shí)核桃‘新新 2’雌花芽分、中（F_2）、后（F_3）的雌花芽及雌花芽分化臨界期的葉芽（JRRNA 測(cè)序，測(cè)序由北京諾禾致源生物公司完成�？� RNA 提取采用脂糖凝膠電泳（1.2%）檢測(cè) RNA 的降解程度，Nanodrop 檢測(cè) R/280），Qubit 對(duì) RNA 濃度進(jìn)行精確定量，Agilent2100 精確檢測(cè) R合格后，使用 Small RNA Sample Pre Kit 構(gòu)建文庫(kù)，利用 Small RN特殊結(jié)構(gòu)（5＇端的磷酸基團(tuán)，3＇端的羥基），以總 RNA 為起始樣 兩端加上接頭，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA。然后進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，PA DNA 片段，切膠回收得到的即為 cDNA 文庫(kù)（圖 2-1）。文庫(kù)構(gòu)建完.0 進(jìn)行初步定量，稀釋文庫(kù)至 1 ng/μl，再采用 Agilent2100 對(duì)文庫(kù)測(cè)，最后使用 Q-PCR 對(duì)文庫(kù)的有效濃度進(jìn)行精確定量（文庫(kù)有效合格后進(jìn)行 HiSeq/MiSeq 測(cè)序。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3500147