香菇C_91-3菌株是本課題組經(jīng)過多年篩選獲得的一株具有較強(qiáng)應(yīng)用價(jià)值的真菌。香菇C_91-3菌株菌絲體發(fā)酵液具有較好的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用已經(jīng)被本課題組所證實(shí)。在此基礎(chǔ)上,通過生物信息學(xué)分析,初步篩選出一些與細(xì)胞凋亡相關(guān)的目的基因,并對其進(jìn)行命名。再通過cDNA末端的快速擴(kuò)增（Rapid Amplification of cDNA ends,RACE）方法和生物信息學(xué)比對,獲得基因全長及相應(yīng)的氨基酸序列。本實(shí)驗(yàn)的研究對象是香菇C_91-3菌株Latcripin-9基因。目的:利用生物信息學(xué)方法尋找并確定Latcripin-9的基因序列、功能域片段及相應(yīng)的氨基酸序列。對Latcripin-9蛋白的二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析預(yù)測,全面獲取Latcripin-9基因的詳細(xì)信息。構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a（+）-Latcripin-9,IPTG誘導(dǎo)使Latcripin-9蛋白在大腸桿菌Rosetta-gami（DE3）中表達(dá),并對誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。通過生物信息學(xué)軟件分析,預(yù)測出Latcripin-9蛋白的生物學(xué)活性及相應(yīng)功能。... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Latcripin-9基因全長序列驗(yàn)證M：DNAMarkerDL20001、2：PCR產(chǎn)物（M-MLV+，M-MLV-）

25圖 3 Latcripin-9 基因核苷酸及相對應(yīng)的氨基酸序列igure 3 The nucleotide sequence and the according amino acid sequence of Latcripin-9 full-length g1.4 Latcripin-9 蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測分析1.4.1 Latcripin-9 蛋白功能域組成及理化性質(zhì)預(yù)測經(jīng) Pfam 數(shù)據(jù)庫分析，可知 Latcripin-9 蛋白具有一個(gè) DyP_Perox 結(jié)構(gòu)域（見，再經(jīng)在線預(yù)測軟件 ExPASy ProtParam 對其進(jìn)行預(yù)測分析可知，該功能域4 個(gè)氨基酸（具體氨基酸組成見表 3 所示），分子量為 28539.2Da，等電點(diǎn)為 4.4中，帶正電荷的殘基（Arg+Lys）總共 13 個(gè)，帶負(fù)電荷的殘基（Asp+Glu）總 個(gè)。不穩(wěn)定指數(shù)為 31.21，脂肪指數(shù)為 73.98，親水性為-0.431。其半衰期分別為0 hours（哺乳動(dòng)物網(wǎng)織紅細(xì)胞，體外），>20 hours（酵母，體內(nèi)），>10 ho

圖 4 Latcripin-9 蛋白功能域預(yù)測結(jié)果Figure 4 The calculating result of the functional domain of Latcripin-9 protein表 4 功能域片段的氨基酸組成Table 4 The Amino acid composition of the functional fragmentsAmino acid Number（個(gè)） Frequency（%）Ala (A)Arg (R)Asn (N)Asp (D)Cys (C)Gln (Q)Glu (E)Gly (G)His (H)Ile (I)Leu (L)Lys (K)2710252011711206824310.23.89.57.60.46.44.27.62.33.09.11.1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Resveratrol: A potential challenger against gastric cancer[J]. Aida Zulueta,Anna Caretti,Paola Signorelli,Riccardo Ghidoni.  World Journal of Gastroenterology. 2015(37)
[2]草蓯蓉提取物對HepG2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[J]. 尹學(xué)哲,王玉嬌,尹基峰,金梅花,金明,全吉淑.  食品科學(xué). 2015(15)
[3]中華補(bǔ)血草5種黃酮類化合物抗氧化和抗腫瘤活性的比較[J]. 董蒙蒙,喻樊,劉佳,湯新慧,高靜,徐永新.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(02)
[4]2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,曾紅梅,鄒小農(nóng),張思維,赫捷.  中國腫瘤. 2015(01)
[5]過氧化氫酶與腫瘤[J]. 杜猛,邢汝東.  北京口腔醫(yī)學(xué). 2014(06)
[6]香菇C91-3轉(zhuǎn)錄本Unigene14872基因Pkinase結(jié)構(gòu)域的克隆表達(dá)及其生物信息學(xué)分析[J]. 杜忠娟,鐘民濤,倫永志,劉奔,張偉,王曉麗,李星云,曹靖,寧安紅,黃敏.  微生物學(xué)雜志. 2014(01)
[7]中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J]. 陳萬青,張思維,曾紅梅,鄭榮壽,鄒小農(nóng),趙平,吳良有,李光琳,赫捷.  中國腫瘤. 2014(01)
[8]DNA損傷修復(fù)調(diào)控因子與腫瘤耐藥的研究進(jìn)展[J]. 趙欣楠,魏敏杰,趙琳.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2013(11)
[9]體外蛋白質(zhì)復(fù)性方法及小分子添加劑在復(fù)性過程中的作用[J]. 余秀娟,趙麗艷,張曉光.  河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(02)
[10]DNA損傷修復(fù)反應(yīng)的雙刃劍效應(yīng)在腫瘤與衰老發(fā)生發(fā)展中的作用[J]. 李小曼,徐紅德,藺美娜,宋曉宇,馮艷玲,羿菲,劉爽,曹流.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2013(02)



本文編號：3487436