柿單寧又稱原花青素（proanthocyanidin,PA）,是引起柿果實產(chǎn)生澀味的主要物質(zhì)。其中完全甜柿（pollination constant&non-astringent,PCNA）在果實成熟時可在樹上自然脫澀,采后即可脆食,其自然脫澀性狀表現(xiàn)為質(zhì)量性狀遺傳特點。而非完全甜柿需人工脫澀方可食用,其自然脫澀性狀表現(xiàn)為數(shù)量性狀遺傳特點。多藥和有毒化合物排出家族（MATE）為跨膜轉(zhuǎn)運類蛋白,廣泛參與次生代謝物向液泡中的轉(zhuǎn)運,其可能與柿原花青素前體的選擇性跨膜轉(zhuǎn)運有關(guān)。Micro RNA（mi RNA）作為一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA廣泛參與調(diào)控植物的生長發(fā)育、次生代謝、生物和非生物脅迫等,但其在柿原花青素代謝中的功能還不明確。本研究首先從柿果實中克隆到一個參與柿原花青素前體跨膜轉(zhuǎn)運的MATE蛋白基因（DkMATE1）,并對其功能進行了驗證。此外,對micro RNA數(shù)據(jù)庫中與中國甜柿原花青素代謝相關(guān)的mi RNA進行篩選,鑒定了mi R858b及其靶基因DkMYB19和DkMYB20參與柿原花青素生物合成。主要結(jié)果如下:1.從中國甜柿‘鄂柿1號’中分離得到了一個DkMATE1... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

不同脫澀類型柿品種分類（Akagietal.,2011）

DkMATE1和miR858參與柿果實原花青素代謝研究32.2柿原花青素的組成和結(jié)構(gòu)柿果實中含有豐富的酚類物質(zhì)，包括縮合單寧和其它酚類化合物，參與不同的生理功能。Matsuo和Ito（1978）鑒定柿中原花青素由兒茶素（C）、兒茶素沒食子酸酯（CG）、沒食子兒茶素（GC）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（GCG）組成，其摩爾比為1:2:1:2。Akagi等（2010b）利用間苯三酚分析柿果實中縮合單寧成分，對黃烷三醇間苯三酚加合物液相檢測，得到三個已知峰和一個未知峰，分別為表兒茶素-間苯三酚（EC-P）、表沒食子酸兒茶素-間苯三酚（EGC-P）和2,3-順式表兒茶素-3-O-沒食子酸鹽-間苯三酚（ECG-P）。柿原花青素屬于原花青素B組，其分子量為1.38×104Da。圖1-2縮合單寧的基本重復單位如果R1=R2=OH，R3=H，該結(jié)構(gòu)單體為（-）-表兒茶素。其他復合物中R1和R3不同的組合位于結(jié)構(gòu)圖下方。R2=O-沒食子�；挥趦翰杷貨]食子酸鹽（Schofieldetal.,2001）Fig.1-2ThebasicrepeatingunitincondensedtanninsIfR1=R2=OH,R3=H,thenthestructureisthatfor(-)-epicatechin.ThegroupsatR1andR3forothercompoundsareindicatedbelowthestructure.R2=O-galloylinthecatechingallates(Schofieldetal.,2001)

華中農(nóng)業(yè)大學2020屆博士研究生學位（畢業(yè)）論文4圖1-3縮合單寧的結(jié)構(gòu)模型如果R=OH或H，該結(jié)構(gòu)單體代表原花色素或原雀嘧啶。46鍵（虛線）是一個可變的黃酮鍵。終端單元位于這種多元結(jié)構(gòu)單元的底部（Schofieldetal.,2001）Fig.1-3ModelstructureforacondensedtanninIfR=HorOHthenthestructurerepresentsprocyanidinorprodelphinidin.The46linkage(dottedline)isanalternativeinterflavanbond.Theterminalunitisatthebottomofsuchamulti-unitstructure(Schofieldetal.,2001)兒茶素單體在C環(huán)2，3位中心不對稱（圖1-2），原花青素的立體化學結(jié)構(gòu)在該位點處存在變異，通過對化合物模型觀察表明這些變異對大部分的原花青素化學反應的影響相對較低。其中R1，R2，R3取代基組可能對原花青素反應具有顯著的影響。R2是一個OH組，有時可以與沒食子酸形成酯化作用（在兒茶素沒食子酸鹽中，R1=R2=OH，R3=O-沒食子�；蔷G茶中一個主要的多酚成分）。原花青素中沒食子酸酯的存在可能會顯著改變其生物學特性（Hagerman,1992）。R1和R2可能會與OH和H產(chǎn)生不同的結(jié)合，導致在不同的試驗反應中生成不同種類的黃烷醇聚合物。由于原花雀啶在B環(huán)的5位置有一個羥基組，因此原花青素可以與原翠雀啶區(qū)分開。例如，在縮合單寧中增加原花雀啶/原花色素比率會增加原花青素與蛋白質(zhì)形成復合物的能力（Aertsetal.,1999）。黃烷醇單體之間的氧化偶聯(lián)最常發(fā)生在4號位和8號位之間，但是也可能發(fā)生在單體的4號位和6號位或其它位置（圖1-3）。而葡萄籽原花青素中黃烷醇單元單

【參考文獻】：
期刊論文
[1]柿果脫澀機理研究新進展[J]. 徐君馳,張青林,徐莉清,郭大勇,羅正榮.  園藝學報. 2016(09)
[2]完全甜柿遺傳改良研究進展[J]. 裴忺,張青林,郭大勇,劉繼紅,羅正榮.  果樹學報. 2015(02)
[3]miRNA與癌癥發(fā)生[J]. 王椋,趙春華.  癌癥進展. 2011(02)
[4]原花青素的生物合成途徑、功能基因和代謝工程[J]. 趙文軍,張迪,馬麗娟,柴友榮.  植物生理學通訊. 2009(05)
[5]柿單寧研究進展[J]. 張寶善,伍曉紅,陳錦屏.  陜西師范大學學報(自然科學版). 2008(01)
[6]單寧細胞形態(tài)與部分柿屬種及品種相關(guān)性研究[J]. 楊勇,阮小鳳,王仁梓,李高潮.  西北植物學報. 2007(08)

博士論文
[1]茶葉兒茶素合成相關(guān)miRNA及靶基因的驗證和表達分析[D]. 孫平.福建農(nóng)林大學 2017
[2]‘金冠’蘋果miRNA克隆分析及Md-miRLn11靶向調(diào)控Md-NBS基因表達影響斑點落葉病抗性研究[D]. 馬超.中國農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：3481106