香蕉枯萎病是一種由病原真菌尖孢鐮刀菌（Fusarium wilt of banana）引起的一種土傳病害,嚴(yán)重影響香蕉的產(chǎn)量,因此對香蕉的產(chǎn)業(yè)構(gòu)成巨大威脅。目前,該病的防治依然是一個難以徹底根除的問題。植物病害生物防治技術(shù)具有對環(huán)境安全、病原物不易產(chǎn)生抗性、改善土壤質(zhì)量、促進(jìn)作物生長等特點(diǎn),因此成為研究的熱點(diǎn)。但植物病害生防菌株的篩選及評價主要依賴于傳統(tǒng)意義上抑菌活性的檢測,而且篩選培養(yǎng)基主要以L、PDA和NA等營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液作為營養(yǎng)物,容易造成生防菌株的誤選與漏選。本研究以實(shí)驗(yàn)室保存的多株對香蕉枯萎病原菌具有拮抗作用的芽胞桿菌為對象,開展香蕉枯萎病拮抗芽胞桿菌綜合評價體系研究,獲得目標(biāo)菌株D34并對其分類鑒定,篩選得到適合工業(yè)生產(chǎn)的液體發(fā)酵培養(yǎng)基；研究生防菌株D34拮抗物質(zhì)特點(diǎn)及對病原尖孢鐮刀菌的作用；通過盆栽試驗(yàn)評價含有生防菌株的發(fā)酵液復(fù)配有機(jī)肥的防治效果。具體結(jié)果如下：1.利用實(shí)驗(yàn)室保存的22株對香蕉枯萎病原菌具有拮抗活性的芽胞桿菌為材料,展開營養(yǎng)適應(yīng)性、生防真菌兼容性、脂肽基因檢測及發(fā)酵液病土抑菌率等四個方面的評價,獲得能在相對貧瘠營養(yǎng)條件下具有活性的拮抗菌株D34,其對生防... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 香蕉枯萎病的研究進(jìn)展
        1.1.1 香蕉枯萎病發(fā)病癥狀及規(guī)律
        1.1.2 香蕉枯萎病原菌特征
        1.1.3 香蕉枯萎病的防控
    1.2 生防芽胞桿菌的研究進(jìn)展
        1.2.1 芽胞桿菌在植物病害防治中的應(yīng)用
        1.2.2 芽胞桿菌生防作用機(jī)制
        1.2.3 芽胞桿菌產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)
    1.3 脂肽抗生素研究概況
        1.3.1 脂肽抗生素分離純化
        1.3.2 脂肽類抗生素的鑒定
    1.4 壤微生物定殖檢測方法的研究進(jìn)展
    1.5 生防菌篩選研究概況
    1.6 生防芽胞桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基研究進(jìn)展
    1.7 微生物有機(jī)肥
    1.8 本研究的目的和意義
    1.9 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 儀器
    2.2 方法
        2.2.1 芽胞桿菌的營養(yǎng)適應(yīng)性評價
        2.2.2 芽胞桿菌與生防真菌兼容性
        2.2.3 芽胞桿菌發(fā)酵液的土壤抑菌率
        2.2.4 芽胞桿菌脂肽基因PCR擴(kuò)增
        2.2.5 菌株D34鑒定
        2.2.6 菌株D34抗病促生類物質(zhì)
        2.2.7 菌株D34液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化
        2.2.8 菌株D34發(fā)酵上清液特點(diǎn)
        2.2.9 菌株D34發(fā)酵上清液脂肽類物質(zhì)鑒定
        2.2.10 菌株D34抗生素敏感性測定
        2.2.11 菌株D34抗生素標(biāo)記及特點(diǎn)
        2.2.12 盆栽實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 芽胞桿菌的綜合評價
        3.1.1 芽胞桿菌的營養(yǎng)適應(yīng)性評價
        3.1.2 芽胞桿菌與生防真菌的兼容性
        3.1.3 芽胞桿菌發(fā)酵液的土壤抑菌率
        3.1.4 芽胞桿菌脂肽基因PCR擴(kuò)增
    3.2 菌株D34鑒定
        3.2.1 菌株D34的16S rRNA測定與序列分析
        3.2.2 菌株D34生理生化鑒定
        3.2.3 菌株D34形態(tài)學(xué)顯微觀察
    3.3 菌株D34抗病促生類物質(zhì)
        3.3.1 菌株D34產(chǎn)β-葡聚糖酶檢測
        3.3.2 菌株D34產(chǎn)果膠酶檢測
        3.3.3 菌株D34產(chǎn)纖維素酶檢測
        3.3.4 菌株D34產(chǎn)幾丁質(zhì)酶檢測
        3.3.5 菌株D34產(chǎn)蛋白酶檢測
        3.3.6 菌株D34產(chǎn)鐵載體檢測
        3.3.7 菌株D34產(chǎn)ACC解氨酶檢測
        3.3.8 菌株D34固氮能力檢測
        3.3.9 菌株D34解磷能力檢測
        3.3.10 菌株D34產(chǎn)吲哚乙酸檢測
    3.4 菌株D34液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化
        3.4.1 不同培養(yǎng)基對芽胞桿菌D34拮抗活性的影響
        3.4.2 不同金屬離子對芽胞桿菌D34拮抗活性的影響
        3.4.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.4 芽胞桿菌D34發(fā)酵濾液對FOC菌絲生長的影響
    3.5 菌株D34發(fā)酵上清液特點(diǎn)
        3.5.1 熱穩(wěn)定性
        3.5.2 pH適應(yīng)性
        3.5.3 酶穩(wěn)定性
        3.5.4 紫外穩(wěn)定性
        3.5.5 金屬離子穩(wěn)定性
        3.5.6 有機(jī)溶劑穩(wěn)定性
        3.5.7 自然穩(wěn)定性
        3.5.8 有效濃度
    3.6 菌株D34發(fā)酵上清液脂肽類物質(zhì)鑒定
        3.6.1 HPLC組分分離及活性測定
        3.6.2 HPLC分離組分LC-MS鑒定
        3.6.3 脂肽類物質(zhì)對病原尖孢鐮刀菌(FOC)抑制作用
        3.6.4 脂肽類物質(zhì)對不同�；筒≡咕V
    3.7 菌株D34抗生素敏感性測定
    3.8 菌株D34抗生素標(biāo)記
        3.8.1 生長曲線測定
        3.8.2 菌落形態(tài)特征
        3.8.3 抑菌活性測定
    3.9 盆栽實(shí)驗(yàn)
        3.9.1 不同處理對香蕉枯萎病病情指數(shù)的影響
        3.9.2 不同處理對根際土壤總呼吸速率的影響
        3.9.3 不同處理對香蕉根際病原菌(FOC)數(shù)量的影響
        3.9.4 不同處理對香蕉根際土壤RD200菌體的數(shù)量影響
        3.9.5 不同處理對香蕉根際土壤RD200芽胞的數(shù)量影響
        3.9.6 不同處理對香蕉生長的影響
        3.9.7 不同處理對根際可培養(yǎng)微生物數(shù)量的影響
        3.9.8 病情指數(shù)、根際土壤微生物數(shù)量和呼吸速率的相關(guān)性分析
4 討論
    4.1 生防菌株的綜合評價
    4.2 拮抗促生作用
    4.3 生防菌株D34的液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化
    4.4 脂肽類物質(zhì)鑒定
    4.5 菌株D34的抗生素標(biāo)記
    4.6 盆栽實(shí)驗(yàn)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3480041