矮牽牛（Petunia hybrida）是當(dāng)前應(yīng)用較普遍的花卉,隨著矮牽牛全基因組測(cè)序工作的完成,矮牽牛常用于植物分子進(jìn)化生物學(xué)、花發(fā)育等相關(guān)研究。TFL1基因?qū)儆贔T/TFL1基因家族,在大多數(shù)的研究報(bào)道中,FT基因的功能一般為促進(jìn)成花轉(zhuǎn)變,而TFL1基因的功能都集中在抑制開花和維持營養(yǎng)生長促進(jìn)分支發(fā)育兩個(gè)方面。在本實(shí)驗(yàn)室之前的研究中發(fā)現(xiàn),矮牽牛FT亞家族中的Ph FT1發(fā)生了功能轉(zhuǎn)變,表現(xiàn)出抑制開花的表型,替代了TFL1基因行使的開花抑制功能;而PhTFL1基因功能也和其他物種中不一樣,PhTFL1基因在根系中表達(dá)水平最高,功能表現(xiàn)為影響矮牽牛根系發(fā)育,在矮牽牛中過量表達(dá)PhTFL1基因會(huì)嚴(yán)重抑制矮牽牛植株根系發(fā)育,而RNAi PhTFL1轉(zhuǎn)基因矮牽牛株系的根系較野生型相比表現(xiàn)為側(cè)根增多。為了進(jìn)一步闡明矮牽牛PhTFL1基因影響植物根系發(fā)育的分子機(jī)制,我們對(duì)PhTFL1基因啟動(dòng)子進(jìn)行了分析;在PhTFL1轉(zhuǎn)基因株系幼苗期取樣進(jìn)行數(shù)字基因表達(dá)譜分析（RNA-seq）,分析了差異表達(dá)基因;最后克隆了PhTFL1基因互作基因VDAC2,初步分析了VDACs基因的序列與結(jié)構(gòu),并做了不同部位... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥開花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（Frédéricetal2016）

矮牽牛PhTFL1基因啟動(dòng)子特性分析及其下游基因挖掘11表型強(qiáng)烈的干涉植株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及下游基因分析，為后續(xù)PhTFL1基因上下游通路研究奠定基礎(chǔ)；同時(shí)克隆了PhTFL1a互作基因PhVDAC2及其同源基因，并對(duì)VDACs基因進(jìn)行了初步的生信分析以及時(shí)空表達(dá)分析。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究PhTFL1基因的功能與分子機(jī)制，特別是互作蛋白及下游候選基因的的相關(guān)研究，對(duì)于探明PhTFL1基因功能的演變的分子機(jī)制提供了一些補(bǔ)充。1.7技術(shù)路線圖1.2技術(shù)路線Fig.1.2Researchscheme備注：黑色字體為已完成部分紅色字體為未完成部分

矮牽牛PhTFL1基因啟動(dòng)子特性分析及其下游基因挖掘212.3.2矮牽牛遺傳轉(zhuǎn)化與陽性檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)中選取處于營養(yǎng)生長階段的野生型W115植株葉片依次搖菌進(jìn)行侵染，葉片不宜太嫩也不宜老，侵染時(shí)間要準(zhǔn)確把握，保證效率的同時(shí)也要防止農(nóng)桿菌反菌及真菌污染。理論情況下，共培條件下培養(yǎng)3天后轉(zhuǎn)入選培條件2周時(shí)能長出愈傷組織。轉(zhuǎn)基因植株采用PCR擴(kuò)增的方法檢測(cè)陽性，在植株幼苗期取葉片提取DNA，用于PCR檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果保留陽性植株，種植到開花時(shí)，再次進(jìn)行PCR陽性檢測(cè)，確保用于自交收種子的矮牽牛植株為陽性轉(zhuǎn)化苗。圖2.1為TFL1c::GUS陽性轉(zhuǎn)化苗自交收種子時(shí)第二次PCR檢測(cè)膠圖。擴(kuò)增產(chǎn)物長度為750bp左右，結(jié)果表明用于收種的轉(zhuǎn)基因株系均為陽性。圖2.1PhTFL1c啟動(dòng)子融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化矮牽牛PCR陽性檢測(cè)M:標(biāo)記；0:空白對(duì)照；1-12:轉(zhuǎn)化苗Fig.2.1PositivePCRdetectioninPetuniatransformedwithPhTFL1cpromoterfusionexpressionvectorM:marker；0:blankcontrol；1-12:Transgenicplant2.3.3GUS染色定性分析PhTFL1a和PhTFL1c的啟動(dòng)子在連接GUS報(bào)告基因后，轉(zhuǎn)化矮牽牛W115植株，經(jīng)T0代PCR檢測(cè)驗(yàn)證陽性后，收取T0代自交種子播種，用于檢測(cè)啟動(dòng)子表達(dá)特點(diǎn)。為了觀察PhTFL1a和PhTFL1c啟動(dòng)子在全發(fā)育時(shí)期的表達(dá)特點(diǎn)，我們首先利用組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)了啟動(dòng)子的表達(dá)模式。由于不可抗原因，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]酵母雙雜交篩選水稻OsJAG互作蛋白[J]. 孔蘭,王鋒,蔡正正,邱榮華,吳春燕,段遠(yuǎn)霖,吳為人.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019(10)
[2]高保守性啟動(dòng)子短序列建模研究[J]. 陳虹,趙海峰,王暢暢,施夢(mèng)軍,馬猛.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(11)
[3]適于基因組測(cè)序的高純度的大豆線粒體基因組DNA提取方法[J]. 李玉秋,張春寶,趙洪錕,譚化,費(fèi)曉燕,趙麗梅,董英山.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(08)
[4]脫落酸通過影響生長素合成及分布抑制擬南芥主根伸長[J]. 袁冰劍,張森磊,曹萌萌,王志娟,李霞.  中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(11)
[5]VDAC3與ABA受體蛋白相互作用的驗(yàn)證以及初步研究[J]. 蔡黎,李德款,劉志斌,馮俊,陳存,李旭鋒,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(05)
[6]乙烯在幼苗根生長發(fā)育中調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J]. 黃維娜,康玉凡.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2013(12)
[7]擬南芥AtGluRS相互作用蛋白質(zhì)VDAC及其轉(zhuǎn)基因植物表型分析[J]. 何菡,嚴(yán)金平,張建軍,劉震,張皖蓉,童仕波,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(02)
[8]煙草鉀離子通道及轉(zhuǎn)基因煙草抗逆性的研究進(jìn)展[J]. 司叢叢,劉好寶,曲平治.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2010(02)
[9]高等植物啟動(dòng)子功能和結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J]. 夏江東,夏平.  楚雄師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(03)
[10]植物基因啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 張春曉,王文棋,蔣湘寧,陳雪梅.  遺傳學(xué)報(bào). 2004(12)

博士論文
[1]基于轉(zhuǎn)錄組比較的牡丹開花時(shí)間基因發(fā)掘[D]. 周華.北京林業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]線粒體VDAC與玉米C型細(xì)胞質(zhì)雄性不育的關(guān)系初探[D]. 徐浩.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]水稻vdac、ant及HL-sp1基因的表達(dá)研究[D]. 羅鳳燕.中南民族大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3474870