發(fā)布時間：2021-11-02 21:35

　　草酰乙酸水解酶（Oxaloacetate acetylhydrolase/Oxaloacetate hydrolase）是香菇（Lentinula edodes）中草酸合成的關(guān)鍵性酶,克隆香菇LeOAH1,并分析其在香菇體內(nèi)與體外的表達(dá)情況,旨為研究香菇LeOAH1的功能奠定基礎(chǔ)。從香菇L808中克隆LeOAH1,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,采用 RT-PCR 和高效液相技術(shù)檢測 LeOAH1在不同pH條件下香菇菌絲內(nèi)的表達(dá)情況和草酸含量。此外,構(gòu)建了重組原核表達(dá)載體 pET28a-oah1,在大腸桿菌中進(jìn)行體外表達(dá)�；蚩寺〗Y(jié)果表明,該基因的gDNA長度為1 906 bp,cDNA長度為 1 356 bp,編碼氨基酸數(shù)量為451個,蛋白分子質(zhì)量約為48.9 kD,等電點(diǎn)為 6.80。生物信息學(xué)分析表明:該酶為不穩(wěn)定的疏水性蛋白,具有α-螺旋（40.08%）、無規(guī)則卷曲（34.59%）、延伸鏈（17.52%）、β-折疊（7.10%）4種二級結(jié)構(gòu);亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)中;序列比對的結(jié)果顯示該酶有保守結(jié)構(gòu)域;系統(tǒng)發(fā)育樹分析該蛋白,與日本香菇OAH的相似度最高,同源性為82%;其次是灰光柄菇,同源性... 

【文章來源】：生物技術(shù)通報. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 供試菌種
        1.1.2 主要試劑與設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 總DNA、RNA提取及cDNA合成
        1.2.2 LeOAH1的基因克隆
        1.2.3 香菇草酰乙酸水解酶LeOAH1基因的生物信息學(xué)分析
        1.2.4 不同pH條件下,草酸含量測定和LeOAH1基因表達(dá)分析
        1.2.5 蛋白的原核表達(dá)及SDS-PAGE分析
        1.2.6 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 香菇LeOAH1基因克隆及基因結(jié)構(gòu)分析
    2.2 香菇LeOAH1基因的同源性分析
    2.3 LeOAH1蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測及分析
    2.4 不同pH條件下草酸含量與LeOAH1基因表達(dá)分析
    2.5 香菇LeOAH1原核表達(dá)分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]熱脅迫下糙皮側(cè)耳實(shí)時熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J]. 侯志浩,趙夢然,陳強(qiáng),張妍,黃晨陽,鄔向麗.  食用菌學(xué)報. 2019(03)
[2]甘蔗抗壞血酸過氧化物酶基因（ScAPX）的克隆及表達(dá)分析[J]. 王竹青,陳云,楊玉婷,蘇亞春,陳珊珊,吳期濱,許莉萍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2015(02)

碩士論文
[1]改造釀酒酵母乙酰輔酶A合成途徑及其在香葉醇生產(chǎn)中的應(yīng)用[D]. 伏貝貝.齊魯工業(yè)大學(xué) 2018
[2]球孢白僵菌pH響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子BbPacC的功能研究[D]. 周橋勝.西南大學(xué) 2015



本文編號：3472413